Цена 5 коп.
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
СОЮЗА ССР
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)
ГОСТ 20730-75
Издание официальное
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СТАНДАРТОВ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР
Москва
РАЗРАБОТАН Всесоюзным Государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов
Директор Бойко Л. Л.
Руководитель темы: Простяков А. П.
Исполнители темы: Агапова 3. А., Цыганкова С. И., Голикова Г. А.
ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР
Член коллегии Третьяков А. Д.
ПОДГОТОВЛЕН К УТВЕРЖДЕНИЮ Всесоюзным научно-исследовательским институтом стандартизации (ВНИИС)
Директор Гличев А. В.
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. № 899
УДК 576.8.093,1(083.74) Группа Р35
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ. БУЛЬОН МЯСО-ПЕПТОННЫЙ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)
Nutrient media.
Meat-pepton broth (for veterinary)
ГОСТ
20730—75
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. № 899 срок действия установлен
с 01.01 1976 г. до 01.01 1981 г.
Несоблюдение стандарта преследуется по закону
Настоящий стандарт распространяется на мясо-пептонный бульон, представляющий собой питательный раствор, предназначенный для выращивания микроорганизмов.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Мясо-пептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующими правилами по ведению технологического процесса, утвержденными в установленном порядке.
1.2. Мясо-пептонный бульон по физико-химическим, биохимическим и биологическим показателям должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл. 1.
Таблица 1
|
Наименования показателей |
Характеристика и нормл |
|
Внешний вид |
Прозрачная жидкость |
|
Цвет |
Желтый |
|
Запах |
Специфический, свежего мясного экстракта и пептона |
|
Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка Содержание общего азота, %, не менее |
Не допускается |
|
0,40 |
Издание официальное ★
Перепечатка воспрещена
©Издательство стандартов! 1975
Наименования показателей
Содержание азота аминогрупп, аминокислот и низших пептидов, %, не менее
Содержание пептонов, %, не менее Содержание сухого вещества, % Содержание белка, %, не более Содержание хлористого натрия, % Концентрация водородных ионов (pH)
Стерильность
Способность поддерживать рост микробов, оптическая плотность, не менее.
Staphylococcus aureus «Лассма-нов»
JEscherichia coli штамм 675
Streptococcus faccalis штамм 6783
Продолжение
Характеристика и нормы
0,С9
2,7
8,0—3,4 0,5 0,5
7,2—7,6
Посев на питательные среды не должен давать роста микрофлоры в течение трех суток в термостате при 37— 38°С
0,70
0,75
0,40
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Мясо-пептонный бульон сдают и принимают сериями.
2.2. Каждая серия мясо-пептонного бульона на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Под серией следует понимать любое количество мясо-пептонного бульона, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.
2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясо-пептонного бульона более 50 л отбирают 2 л, при объеме менее 50 л — 0,6 л.
Если вся серия мясо-пептонного бульона расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясо-пептонный бульон расфасован во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясо-пептонного бульона в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясо-пептонного бульона.
2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясо-пептонного
бульона считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта.
2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
3.1. Методы отбора проб
3.1.1. Пробу мясо-пептонного бульона в количестве 2 или 0,6 л (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.
Пробу объемом 2 л расфасовывают в 10 флаконов по 200 мл. Пять флаконов используют для анализа, а пять — оставляют в архиве государственного контролера.
Пробу, отобранную от серии мясо-пептонного бульона объемом менее 50 л, в архиве не оставляют.
3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясо-пептонным бульоном в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивая вниз пробками, а бутыли покачивают.
3.3. Запах мясо-пептонного бульона определяют в пробе органолептически
3.4. Определение содержания общего азота
3.4.1. Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют: весы аналитические;
колбу Кьельдаля вместимостью 50—100 мл по ГОСТ 10394—63;
аппарат микро-Кьельцаль;
элемент нагрева (плитку, горелку);
пипетки на 1, 2, 5 мл по ГОСТ 1770—64;
бюретки по ГОСТ 1770—64;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72;
кислоту серную по ГОСТ 4204—66, концентрированную и 0,1 н. раствор;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—66, 30—33%-ный и 0,1 н. растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;
перекись водорода по ГОСТ 10929—64; метиловый красный по ГОСТ 5853—51; метиленовую синь;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962—67; метиловый оранжевый по ГОСТ 10816—64, 0,1%-ный раствор
3.4.2. Проведение испытания
Мясо-пептонный бульон в количестве 1 мл помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 мл концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора — перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 мл через каждые 15—20 мин до полного обесцвечивания раствора.
После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляя 10—12 мл дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.
В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 мл 0,1 н. раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 мл 96%-ного этилового спирта.
Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30—33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 мл раствора.
Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона в колбу для минерализации беруг 1 мл дистиллированной воды.
3.4.3. Обработка результатов
Содержание общего азота в мясо-пептонном бульоне (X) в процентах вычисляют по формуле
(/л:—otooi4.loo
где V — количество 0,1 н. раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, мл;
К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. серной кислоты;
V\ — количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, или в контрольном опыте, мл;
К\ — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;
V2 — количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл; 0,0014 — количество азота, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора серной кислоты, г.
За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать ±0,5%.
3.5. Определение содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов
3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: рН-метр;
стаканы лабораторные по ГОСТ 10394—63;
пипетки, бюретки по ГОСТ 1770—64;
формалин технический по ГОСТ 1625—61;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—66, 0,1 н. раствор;
фенолфталеин по ГОСТ 5850—72, 1%-ный спиртовой раствор;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.
3.5.2. Подготовка к испытанию
Непосредственно перед проведением анализа готовят формоль-ную смесь. Для этого к 50 мл формалина добавляют 1 мл 1%-ного раствора фенолфталеина и ОД н. раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слаборозового цвета.
3.5.3. Проведение испытания
К 2 мл мясо-пептонного бульона приливают 18 мл дистиллированной воды и доводят ОД н. раствором гидрата окиси натрия pH смеси до 7,0. Затем приливают 2 мл формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют ОД н. раствором гидрата окиси натрия до pH 9,2.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 мл мясо-пептонного бульона берут 2 мл дистиллированной воды.
3.5.4. Обработка результатов
Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пепти-дов в мясо-пептонном бульоне (ЛД) в процентах вычисляют по формуле
v (Г—ГД . к • 0,0014 . 100 Л1~~ 2 ’
где V — количество ОД н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;
V) — количество ОД н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, мл;
К—поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;
0,0014 — количество азота, соответствующее 1 мл ОД н. раствора гидрата окиси натрия, г;
2 — количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%.
3.6. Определение содержания пептонов
3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: фотоэлектроколориметр или спектрофотометр; пипетки по ГОСТ 1770—64;
пробирки по ГОСТ 10515—63;
фильтры бумажные;
воронки стеклянные по ГОСТ 8613—64;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—66, 10%-ный раствор;
медь сернокислую по ГОСТ 4165—68, 2%-ный раствор;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.
3.6.2. Подготовка к испытанию
3.6.2.1. При построении градуировочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию истинного пептона в процентах,, по оси ординат — оптическую плотность (Е) согласно данным, приведенным в табл. 2.
Таблица 2
|
Концентрация истинного пептона, % |
Оптическая плотность Е |
|
0 50 |
0 550 |
|
0 25 |
0 280 |
|
0,17 |
0,190 |
3.6.3. Проведение испытания
В пробирку наливают 10 мл мясо-пептонного бульона в разведении 1 : 10, прибавляют по 1 мл 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.
Одновременно проводят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 мл разведенного мясо-пептонного бульона берут 10 мл дистиллированной воды.
Через 2 мин смесь фильтруют через бумажные фильтры. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волн 540—560 нм или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.
3.6.4. Обработка результатов
Концентрацию истинного пептона в мясо-пептонном бульоне определяют по градуировочному графику.
Оптическая плотность (Е) мясо-пептонного бульона равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в
контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т. е. на разведение мясо-пептонного бульона).
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±5%.
3.7. Определение содержания сухого вещества
3.7.1. Аппаратура
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;
шкаф сушильный лабораторный по ГОСТ 7365—55;
эксикаторы по ГОСТ 6371—64;
стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 7148—70;
пипетки по ГОСТ 1770—64.
3.7.2. Проведение испытания
В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясо-пептонный бульон в количестве 1,0—1,2 г. Затем бюксу с мясо-пептонным бульоном высушивают в сушильном шкафу при температуре 100—105°С до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями будет не более 0,0002 г.
Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.
3.7.3. Обработка результатов
Содержание сухого вещества в мясо-пептонном бульоне (Х2) в, процентах вычисляют по формуле
_ (/TZo “— TYl} * 100
(тпх — т)
где т — масса пустой бюксы с крышкой, г;
-—масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном до высушивания, г;
т2 — масса бюксы с крышкой и с мясо-пептонным бульоном после высушивания, г.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,2%.
3.8. Определение содержания белка (по методу Лоури)
3.8.1. Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
фотоэлектроколориметр; пробирки стеклянные по ГОСТ 10515—63; пипетки по ГОСТ 1770—64; фильтры бумажные;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328—66, 0,1 н. раствор; натрий углекислый по ГОСТ 84—66;
натрий виннокислый по ГОСТ 656—73 или калий виннокислый двузамещенный по ГОСТ 3655—71, 1%-ный раствор; медь сернокислую по ГОСТ 4165—68; натрий вольфрамовокислый по ГОСТ 18289—72; натрий молибденовой и :лый по ГОСТ 10931—64; кислоту ортофосфорную 85%-ную; кислоту соляную по ГОСТ 3118—67; литий сернокислый по ГОСТ 10563—63; бром по ГОСТ 4109—64; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.
3.8.2. Подготовка к испытанию Приготовление реактива А
Навеску углекислого натрия массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 мл 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.
Приготовление реактива В
Навеску сернокислой меди массой 0,5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 мл 1 %-ного раствора дву-замещенного виннокислого натрия или калия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать. Приготовление реактива С
Реактив С готовят непосредственно перед определением путем смешивания 50 частей реактива А и 1 части реактива В.
Приготовление реактива Д
Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 л колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.
В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 мл дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 мл концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы сстсрожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение можно вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.
Пссле окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 мл дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15 мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор
доводят в мерной колбе до 1 л, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка, затем в реактиве определяют концентрацию кислоты. Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1 : 10 (1 мл реактива и 9 мл воды) и титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3—4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н, щелочи, израсходованного на титрование 1 мл реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6—2,3 Н.
Приготовление реактива Е
Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н. раствором кислоты, то для приготовления 1 н. раствора Е надо брать 10 мл реактива Д и 13 мл дистиллированной воды
Построение градуировочного графика для определения белка
Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,10 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п. 3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворах определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах).
Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по ве личине оптической плотности лежало в пределах 0,2—0,8, где точность измерения наиболее высокая.
3.8 3. Проведение испытания
В пробирку наливают 1 мл разведенного 1 : 10 мясо-пептонного бульона, добавляют 5 мл реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 мл реактива Е. Одновременно ставят конт роль на реактивы, для чего вместо мясо-пептонного бульона берут 1 мл дистиллированной вэды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30—40 мин.
Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630—640 нм) против воды в 5-миллиметро-вых кюветах. Из величин оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помошью градуировочного графика определяют содержание бел
ка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед постановкой цветной реакции.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05%.
3.9. Определение содержания хлорида натрия
3.9.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: весы аналитические;
элемент нагрева (горелку, плитку); пипетки по ГОСТ 1770—64; бюретки по ГОСТ 1770—64; стаканы лабораторные по ГОСТ 10394—63; квасцы железоаммонийные по ГОСТ 4205—68, насыщенный раствор;
калий роданистый по ГОСТ 4139—55 или аммоний роданистый по ГОСТ 3768—64, 0,1 н. раствор;
кислоту азотную по ГОСТ 4461—67, концентрированную; серебро азотнокислое по ГОСТ 1277—63, 0,1 н. раствор; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.
3.9.2. Проведение испытания
Мясо-пептонный бульон в количестве 20 мл помещают в стакан и добавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты и 10 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра.
Полученную смесь нагревают до начала кипения и быстро охлаждают путем погружения стакана в сосуд с водой комнатной температуры. После охлаждения к смеси добавляют 2 мл насыщенного раствора железоаммонийных квасцов и титруют 0,1 н. раствором роданистого калия (или роданистого аммония) до появления желтовато-розового окрашивания.
3.9.3. Обработка результатов
Содержание хлорида натрия в мясо-пептонном бульоне (А”3) в. процентах вычисляют по формуле
(Ук—УгК,) 0,005844-100
где V — количество 0,1 н. раствора азотнокислого серебра, взятое в стакан с пробой, мл;
К — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;
Vi — количество 0,1 н. раствора роданистого калия (или роданистого аммония), израсходованное на титрование испытуемой пробы, мл;
К\ — поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора роданистого калия (или роданистого аммэния);
0,005844 — количество хлэрида натрия, соответствующее 1 мл 0,1 н. раствора азотнокислого серебра;
V2 — количество мясо-пептонного бульона, взятое на анализ, мл.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,01%.
ЗЛО. Определение концентрации водородных ионов (pH)
3.10Л. Аппаратура и материалы
Для проведения испытания применяют:
рН-метр;
стаканы лабораторные по ГОСТ 10394—63; воронки стеклянные; фильтры бумажные.
3.10.2. Проведение испытания
Мясо-пептонный бульон фильтруют через бумажный фильтр и в прозрачном фильтрате определяют pH по инструкции, приложенной к рН-метру.
3.11. Определение стерильности
3.11.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: термостат с температурой нагрева 37—38°С; автоклав;
флаконы вместимостью 200 мл;
пипетки по ГОСТ 1770—64;
пробирки стеклянные по ГОСТ 10515—63;
воронки стеклянные;
пробки ватномарлевые;
фильтры бумажные;
пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805—68; агар микробиологический по ГОСТ 17206—71.
3.11.2. Подготовка к испытанию
Готовят в соответствии с действующей рецептурой, мясо-пептон-ный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА) и мясо-пептон-ный-печеночный бульон (МППБ) под маслом (среда Китт-Тароц-ци). Среды разливают по 8—10 мл в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см2.
3.11.3. Проведение испытания
Мясо-пептонный бульон (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре.
Взятую стерильно пробу мясо-пептонного бульона расфасовывают по 100 мл в четыре флакона вместимостью 200 мл. Затем высевают мясо-пептонный бульон в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6—8 пробирок с каждой средой. Посев производят добавлением в каждую пробирку по 0,2 мл испытываемого мясо-пептонного бульона. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при температуре 37—38°С. Среды в пробирках и мясо-пептонный бульон во флаконах должны оставаться стерильными.
3.11.4. Обработка результатов
При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясо-пептонного бульона бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясо-пептонного бульона также бракуется.
При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов и пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясо-пептонного бульона бракуют.
3.12. Определение способности поддерживать рост микробов
3.12.1. Аппаратура, материалы и реактивы Для проведения испытания применяют: весы технические;
термостат;
автоклав;
рН-метр;
пипетки по ГОСТ 1770—64;
бюретки по ГОСТ 1770—64;
пробирки стеклянные по ГОСТ 10515—63;
воронки стеклянные;
пробки ватномарлевые;
фильтры бумажные;
пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805—68; агар микробиологический по ГОСТ 17206—71.
3.12.2. Подготовка к испытанию
Готовят согласно действующей рецептуре на основе испытуемого мясо-пептонного бульона мясо-пептонный агар, добавляя к бульону 2% микробиологического агара, и устанавливают pH среды 7,4.
Испытуемый мясо-пептонный бульон и приготовленный мясо-пептонный агар разливают по 8—10 мл в пробирки, закрывают ватномарлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см2.
3.12.3. Проведение испытания
Стерильный мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный агар засевают суточными культурами: Staphylococcus aureus «Лассма-нов», Esherichia coli, штамм 675, Streptococcus faccalis, штамм 6783, полученными из Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских препаратов им. Л. А. Тарасевича. Посев каждой культуры производят пастеровской петлей в три пробирки с МПБ и в три пробирки с МПА. Инкубацию проводят в течение 24 ч в термостате при 37—38°С.
Рост культуры должен быть типичным и обильным.
3.12.4. Обработка результатов
Типичность роста суточных культур определяют визуально и под микроскопом.
Интенсивность роста на МПА оценивают визуально, в МПБ — визуально и на фотоэлектроколориметре при длине волны 620— 640 нм в кюветах с рабочей длиной 5 мм.
4. РАСФАСОВКА, УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
4.1. Мясо-пептонный бульон стерильно расфасовывают в стек* лянные бутыли (баллоны) вместимостью 10±0,5 и 20±1 л. Допускается более мелкая расфасовка — флаконы вместимостью 200 и 500 мл.
4.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками по ГОСТ 7852—65, которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.
4.3. На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:
наименования препарата;
количества препарата в л;
номера серии препарата;
даты изготовления;
срока годности;
условий хранения;
обозначения настоящего стандарта.
4.4. Мясо-пептонный бульон хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4—10°С.
4.5. Мясо-пептонный бульон транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п.4.4. Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18°С, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.
4.6. Срок годности мясо-пептонного бульона 6 месяцев со дня изготовления. По истечении указанного срока мясо-пептонный бульон подвергают испытанию и в случае соответствия требованиям, установленным настоящим стандартом, срок годности может быть продлен еще на 3 месяца.
Редактор Я. Е. Шестакова Технический редактор В. Ю. Смирнова Корректор И. Л, Хиниц
Сдано в наб. 18 04 75 Подп. в печ. 25 05 75 1,0 п. л. Тир. 6000 Цена 5 коп.
Издательство стандартов. Москва, Д-22, Новопресненский пер., 3 Тип. «Московский печатник». Москва, Лялин пер.. 6. Зак. 683
Изменение -Vt I ГОСТ 20730—75 Питательные среды. Бульон мясопептонный (для иетсрннарных целей)
Утверждено и введено в действие Посгановлением Государственного комитета СССР но стандартам от 28.06.89 № 2194
Дата введения 01.01.90
Наименование стандарта дополнить словами: «Технические условия»; «Specifications».
По всему тексту стандарта заменить единицу: мл на см3.
Пункт 1.1 изложить в новой редакции: «1.1. Мясопептонный бульон должен изготавливаться в соответствии с действующим технологическим регламентом из мясной воды по ГОСТ 20729—75 с добавлением 1 % пептона и 0,5 % хлорида натрия в разведениях 1:1, 1:2 и 1:4».
Пункт 1.2. Таблицу 1 изложить в новой редакции:
Таблица 1
Наименование показателя
Норма для разведений 1:2
1:4
Внешний вид
Цвет
Запах
Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка Массовая доля общего азота, %, не менее
Массовая доля азота, аминогрупп, аминокислот и низших пептидов, %,
не менее
Массовая доля пептонов, %, не менее Массовая доля сухого вещества, %, не менее
Массовая доля белка, %, не более Массовая доля хлористого натрия, % Концентрация водородных ионов (pH) Стерильность
Способность поддерживать рост микробов, оптическая плотность, не менее,
для
Staphylococcus aureus «Лоссманов»
Escherichia coli штамм 675 Streptococcus faecalis штамм 6783
Прозрачная жидкость Желтый | Светло-желтый Специфический, свежего мясного экстракта и пептона
Не допускается
|
0,40 |
0,25 |
0,20 |
|
0,09 |
0,06 |
0,04 |
|
2,7 |
1,8 |
1,4 |
|
3,0 |
2,0 |
1.1 |
|
0,60 |
0,40 0,8 ±0,1 7,2 — 7,6 |
0,30 |
|
Посев на питательные среды |
должен давать роста микрофлоры в течение 3 сут в термостате при 37—
38 °С
0,70
0,75
0,40
0,30
0,40
0,25
Рост типичный
То же
(Продолжение см. с. 262)
Пункты 3.4.1, 35.1, 3.6 1, 3.7.1, 38 1, 3.9 1, 3.11.1, 3 12 1. Заменить ссылку: ГОСТ 1770-64 на ГОСТ 1770-74.
Пунмы 3 1 I, 3.5.1, 3.9.1, 3 10.1. Заменить ссылку: ГОСТ 10394-63 на ГОСТ 25336—82.
Пункт 3.4.1. Заменить ссылки. ГОСТ 4204—66 на ГОСТ 4204—77, ГОСТ 10929—64 на ГОСТ 10929—76; исключить ссылки: ГОСТ 5853—61, ГОСТ 10816— —64.
Пункты 3.4.1, 3.5.1, 3.6.1, 3.8.1. Заменить ссылку: ГОСТ 4328—66 на ГОСТ 4328—77.
Пункт 3.5.1. Заменить ссылку: ГОСТ 1625—61 на ГОСТ 1625—75; исключить ссылку: ГОСТ 5850—72.
Пункты 3.6.1, 3.8.1, 3.11.1, 3.12.1. Заменить ссылку: ГОСТ 10515—75 на ГОСТ 25336_82.
Пункты 3.6.1, 3.8.1. Заменить ссылку: ГОСТ 4165—68 на ГОСТ 4165—78\
Пункт 3.6.1. Исключить слова: «фильтры бумажные», «воронки стеклянные по ГОСТ 8613—64»;
дополнить абзацем: «центрифуги настольные типа ОПН-8—14,2».
Пункт 3.6.3. Третий абзац. Заменить слова: «Через 2 мин смесь фильтруют через бумажные фильтры» на «Через 2 мин смесь центрифугируют 10 мин с частотой вращения 3000 —4000-1».
Пункт 3.7.1. Заменить ссылки: ГОСТ 6371—64 на ГОСТ 25336—82, ГОСТ 7148—70 на ГОСТ 25336—82; исключить ссылку: ГОСТ 7365—55.
Пункт 3.8.1. Заменить ссылки: ГОСТ 84—66 на ГОСТ 84—76, ГОСТ 18289— —72 на ГОСТ 18289—78, ГОСТ 10931—64 на ГОСТ 10931—74, ГОСТ 4109-64 на ГОСТ 4109—79; исключить ссылки: ГОСТ 10563—63; ГОСТ 656—73, ГОСТ 3655—71.
Пункт 3.9.1. Заменить ссылки: ГОСТ 4205—68 на ГОСТ 4205—77, ГОСТ 4139—65 на ГОСТ 4139—75, ГОСТ 4461—67 на ГОСТ 4461—77, ГОСТ 1277—63 на ГОСТ 1277—75; исключить ссылку: ГОСТ 3768—64.
Пункт 3.9.2. Второй абзац изложить в новой редакции: «2 см3 мясопептон-ного бульона помещают в стакан, добавляют 20 см3 воды, 1 см3 концентрированной азотной кислоты и 10 см3 0,1 н. раствора азотнокислого серебра».
Пункт 3.9.3. Формулу изложить в новой редакции:
(VK—VtKJ -0,005844-100
Ха— У
¥ 2
Пункты 3.11.1, 3.12.1. Заменить ссылки: ГОСТ 13805—68 на ГОСТ 13805—76, ГОСТ 17206—71 на ГОСТ 17206—84.
Раздел 4. Наименование. Исключить слово: «расфасовка».
Пункт 4.2. Исключить ссылку: ГОСТ 7852—65.
(ИУС № и 1989 г.)
