ГОСТ 29032-91
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ
И ОВОЩЕЙ
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСИМЕТИЛФУРФУРОЛА
Издание официальное
Москва
Стандартинформ
2010
УДК 664.841/851.001.4:006.354
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
Группа Н59
СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛОДОВ И ОВОЩЕЙ
Методы определения оксиметилфурфурола
Fruit and vegetable products.
Methods for determination of hydroxymethylfurfural
MKC 67.080.01 ОКСТУ 9109
ГОСТ
29032-91
Дата введения 01.07.92
Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки плодов и овощей и устанавливает методы определения оксиметилфурфурола, образующегося при тепловой обработке плодов и овощей.
Требования стандарта являются обязательными.
1. ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД
1.1. Сущность метода
Метод основан на измерении интенсивности окраски производного оксиметилфурфурола с и-толуидином и барбитуровой кислотой в водной вытяжке из пробы продукта. Нижний предел определения оксиметилфурфурола — 2 мг/кг.
Метод не распространяется на продукты переработки цитрусовых плодов.
1.2. Отбор и подготовка проб
Отбор проб — по ГОСТ 26313, подготовка их к испытаниям — ГОСТ 26671.
1.3. Аппаратура, материалы, реактивы
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 20 г не ниже 3-го класса точности.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 500 г 4-го класса точности.
Колориметр фотоэлектрический лабораторный по НТД с пределами измерений оптической плотности от 0 до 2 и пределом допускаемой основной абсолютной погрешности при измерении коэффициента пропускания не более +1 %, со светофильтром с длиной волны, (540+10) нм и кюветами рабочей длины 30 мм.
Стаканы по ГОСТ 25336 исполнения 1 типа В вместимостью 50 и 150 см3.
Колба плоскодонная по ГОСТ 25336 исполнения 2 вместимостью 250 см3.
Воронка лабораторная по ГОСТ 25336 типа В диаметром 56 мм и высотой 80 мм.
Пипетка по НТД исполнения 6 или 7 вместимостью 10 см3.
Пипетка по НТД исполнения 4 или 5 вместимостью 2 см3.
Колбы мерные по ГОСТ 1770 исполнения 2 вместимостью 50, 100 или 250 см3.
Цилиндр мерный по ГОСТ 1770 вместимостью 25 или 50 см3.
Баня водяная.
Электроплитка по ГОСТ 14919.
Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498 с пределом допускаемой погрешности +1 °С в диапазоне измерений 0—100 °С.
Фильтры бумажные обеззоленные марки ФОМ по ГОСТ 12026.
Оксиметилфурфурол кристаллический, перекристаллизованный при температуре (115+3) °С и давлении 1,3 Па.
* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104—2001. С 1 января 2010 г. на территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228—2008.
Издание официальное ★
Перепечатка воспрещена
© Издательство стандартов, 1991 © СТАНДАРТИНФОРМ, 2010
Калий железистосинеродистый 3-водный по ГОСТ 4207, х. ч., раствор концентрацией 150 г/дм3 (раствор Карреза I).
Цинк уксуснокислый 2-водный по ГОСТ 5823, ч. д. а., раствор концентрацией 300 г/дм3 (раствор Карреза II).
и-Толуидин, ч.
Кислота барбитуровая, ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61, х. ч.
Спирт изопропиловый (2-пропанол) по ГОСТ 9805, ч.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
1.4. Подготовка к испытанию
1.4.1. Приготовление основного раствора оксиметилфурфурола
0,1000 г кристаллического оксиметилфурфурола количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. 1 см3 полученного раствора переносят пипеткой в другую колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Получают раствор оксиметилфурфурола концентрацией 10 мкг/см3. Раствор хранят в холодильнике при температуре не выше 5 °С в сосуде с притертой пробкой, завернутой в алюминиевую фольгу, не более 2 мес.
1.4.2. Приготовление реактивов для проведения цветной реакции
Реактив 1. 10,00 г «-толундина растворяют в 60—70 см3 изопропилового спирта при нагревании на водяной бане при температуре 45—50 °С, добавляют 10 см3 уксусной кислоты, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, охлаждают до 20 °С и доводят до метки изопропиловым спиртом.
Реактив 2. 0,50 г барбитуровой кислоты растворяют в 60—70 см3 дистиллированной воды при нагревании на водяной бане при температуре 45—50 °С, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, охлаждают до 20 °С и доводят до метки дистиллированной водой.
Реактивы 1 и 2 хранят в холодильнике при температуре не выше 5 °С в плотно закрытых сосудах, завернутых в алюминиевую фольгу. Срок годности реактивов 1 и 2 при этих условиях — 1 мес.
1.4.3. Построение градуировочного графика
1.4.3.1. Приготовление контрольного раствора
В стакан вместимостью 50 см3 вносят пипеткой 4,5 см3 дистиллированной воды и 7,5 см3 реактива 1, перемешивают.
1.4.3.2. Приготовление рабочих растворов
В 6 стаканов вместимостью 50 см3 вносят пипеткой 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 и 3,0 см3 основного раствора оксиметилфурфурола. Дистиллированной водой с помощью пипетки доводят объем содержимого до 3,0 см3. Масса оксиметилфурфурола в каждом растворе равна соответственно 5, 10, 15, 20, 25 и 30 мкг.
1.4.3.3. Проведение цветной реакции и фотометрирование
В стаканы с рабочими растворами добавляют по 7,5 см3 реактива 1, перемешивают. С содержимым каждого стакана поочередно проводят следующие операции. В стакан пипеткой вносят 1,5 см3 реактива 2, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра и наблюдают изменение оптической плотности в течение 3—4 мин от момента внесения реактива 2 при светофильтре с длиной волны, соответствующей максимуму пропускания, (540+10) нм против контрольного раствора. Отмечают максимальное значение оптической плотности.
1.4.3.4. По полученным данным строят график зависимости оптической плотности от количества оксиметилфурфурола в микрограммах.
1.5. Проведение испытания
1.5.1. Приготовление водной вытяжки из образца
Навеску продукта массой 40,0—60,0 г (в зависимости от предполагаемого содержания оксиметилфурфурола) помещают в стакан вместимостью 150 см3, смешивают с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3. Цилиндром добавляют 15 см3 раствора Карреза I и 15 см3 раствора Карреза II. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и фильтруют в плоскодонную колбу через бумажный складчатый фильтр.
1.5.2. Проведение цветной реакции и фотометрирование
В два стакана вместимостью 50 см3 вносят пипеткой 3 см3 водной вытяжки из образца и 7,5 см3 реактива 1, перемешивают. В один из стаканов добавляют 1,5 см3 дистиллированной воды, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра (контрольный раствор). В другой стакан
добавляют 1,5 см3 реактива 2, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра и наблюдают изменение оптической плотности в течение 3—4 мин от момента внесения реактива 2 при светофильтре с длиной волны, соответствующей максимуму пропускания, (540+10) нм против контрольного раствора. Отмечают максимальное значение оптической плотности.
1.6. Обработка результатов
Массовую долю оксиметилфурфурола (Ж), млн-1 (мг/кг), вычисляют по формуле
v_m\ vo
Л TZ ’
vi то
где mi — масса оксиметилфурфурола в испытуемом растворе, найденная по градуировочному графику, мкг;
Vq — объем водной вытяжки из пробы продукта, см3;
V\ — объем вытяжки, используемой для проведения цветной реакции, см3;
/«0 — масса навески продукта, г.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемое относительное расхождение между которыми не должно превышать 5 % (Р = 0,95).
2. МЕТОД ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
2.1. Сущность метода
Метод основан на экстракции оксиметилфурфурола из продукта органическим растворителем и определении оксиметилфурфурола с помощью метода тонкослойной хроматографии. Нижний предел определения оксиметилфурфурола — 8 мг/кг.
Метод распространяется на продукты переработки цитрусовых плодов.
2.2. Отбор и подготовка проб
Отбор проб и подготовка их к испытаниям — по и. 1.2.
2.3. Аппаратура, материалы, реактивы
При проведении испытания используют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в и. 1.3, за исключением фотоэлектроколориметра, и-толуидина, барбитуровой и уксусной кислот со следующими дополнениями:
– микрошприц МШ-10 вместимостью 0,01 см3;
– камеру для тонкослойной хроматографии с притертой крышкой;
– колбу круглодонную по ГОСТ 25336 исполнения 2 с взаимозаменяемым конусом 14/23 вместимостью 50 см3;
– распылитель стеклянный с грушей;
– вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556;
– пластинки для тонкослойной хроматографии «Силуфол» 15 х 15 см фирмы Кавалиер, ЧССР;
– эфир этиловый технический по НТД, не содержащий перекисей;
– эфир этиловый уксусной кислоты по ГОСТ 22300, ч. д. а. (этилацетат);
– кислоту муравьиную по ГОСТ 5848;
– бензидин, раствор в муравьиной кислоте концентрацией 5 г/дм3;
– натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х. ч., прокаленный.
2.4. Подготовка к испытанию
2.4.1. Приготовление основного раствора оксиметилфурфурола
0,1000 г кристаллического оксиметилфурфурола количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки этилацетатом и тщательно перемешивают. 1 см3 полученного раствора переносят пипеткой в другую мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки этилацетатом и тщательно перемешивают. Получают раствор оксиметилфурфурола концентрацией 10 мкг/см3. Раствор хранят в холодильнике при температуре не выше 5 °С в сосуде с притертой пробкой, плотно завернутой в алюминиевую фольгу, не более 6 мес.
2.5. Проведение испытания
2.5.1. Приготовление водной вытяжки из образца
Водную вытяжку из образца готовят по и. 1.5.1.
2.5.2. Экстрагирование оксиметилфурфурола из водной вытяжки
В стакан вместимостью 50 см3 пипетками вносят 1,0 см3 водной вытяжки из образца и 10,0 см3 этилового эфира. Содержимое перемешивают в течение 1 мин, затем в стакан добавляют около 5 г
сернокислого натрия. Содержимое стакана перемешивают стеклянной палочкой, разрушая крупные комки соли. Смеси дают отстояться, после чего эфир декантируют через ватный тампон в круглодонную колбу. Остаток в стакане промывают еще два раза свежими порциями эфира, каждый раз тщательно перемешивая содержимое стакана. Эфирный экстракт упаривают досуха на водяной бане при температуре 35—40 °С. Остаток в круглодонной колбе перерастворяют в 0,5 см3 этилацетата.
2.5.3. Хроматографическое разделение
На пластинку «Силуфол» снизу и сверху наносят две тонкие карандашные линии на расстоянии 2 см от краев. На нижней линии отмечают 12 точек на расстоянии 8—10 мм друг от друга, при этом расстояние от крайних точек до краев пластины должно быть не менее 1 см. В шесть точек микрошприцем наносят различные объемы основного раствора оксиметилфурфурола, чередуя пятна со свободными точками. Количество оксиметилфурфурола в пятнах должно быть от 0,025 до 0,150 мкг. В оставшиеся точки микрошприцем наносят этилацетатные экстракты из исследуемых образцов (от одного до шести), объемом 0,001—0,020 см3 в зависимости от ожидаемого содержания оксиметилфурфурола. Пластинку стартовой линией вниз помещают в камеру для тонкослойной хроматографии, предварительно заполненную этилацетатом на высоту около 1 см. Развитие хроматограммы проводят до достижения фронтом растворителя верхней карандашной линии. Пластинку извлекают из камеры и сушат в вытяжном шкафу до исчезновения запаха растворителя.
2.5.4. Обнаружение оксиметилфурфурола
Пластинку опрыскивают из распылителя раствором бензидина, затем сушат в вытяжном шкафу в течение 5—10 мин. Оксиметилфурфурол обнаруживают в виде желтых пятен. Обнаружение на пластинке пятна, соответствующего по цвету и хроматографической подвижности пятнам основного раствора оксиметилфурфурола, свидетельствует о наличии оксиметилфурфурола в продукте. Количество оксиметилфурфурола определяют, сравнивая размер и интенсивность окраски пятен основного раствора оксиметилфурфурола и пятна оксиметилфурфурола в анализируемой пробе.
2.6. Обработка результатов
Массовую долю оксиметилфурфурола (X), млн-1 (мг/кг), вычисляют по формуле
Y_«i – Vi-Уз
т -V2-V4 ’
где /Л] — количество оксиметилфурфурола, обнаруженное в пятне, мкг;
V\ — объем водной вытяжки из пробы продукта, см3;
V3 — общий объем этилацетатного экстракта, см3;
т — масса навески продукта, г;
V2 — объем водной вытяжки, используемый для экстрагирования оксиметилфурфурола, см3;
V4 — объем этилацетатного экстракта, наносимого на пластинку, см3.
За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемое относительное расхождение между которыми не должно превышать 20 % (Р= 0,95).
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности, Всесоюзным научно-исследовательским и конструкторско-технологическим институтом по переработке фруктов и винограда и ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»
РАЗРАБОТЧИКИ
B. И. Рогачев, д-р техн. наук; С.Ю. Гельфанд, канд. техн. наук; Т.Н. Медведева, канд. техн. наук; А.И. Погосян, канд. техн. наук; Э.В. Дьяконова, канд. техн. наук; А.Э. Мельник;
C. Р. Цимбалаев; Е.В. Йорга; канд. техн. наук; И.М. Соболева
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 17.06.91 № 882
3. Раздел I настоящего стандарта «Фотометрический метод» подготовлен с учетом требований международного стандарта ИСО 7466—86 «Продукты переработки плодов и овощей. Определение содержания 5—оксиметилфурфурола» с изменениями, отражающими потребности народного хозяйства
4. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка |
Номер пункта |
Обозначение НТД, на который дана ссылка |
Номер пункта |
ГОСТ 61-75 |
1.3 |
ГОСТ 12026-76 |
1.3 |
ГОСТ 1770-74 |
1.3 |
ГОСТ 14919-83 |
1.3 |
ГОСТ 4166-76 |
2.3 |
ГОСТ 22300-76 |
2.3 |
ГОСТ 4207-75 |
1.3 |
ГОСТ 24104-88 |
1.3 |
ГОСТ 5556-81 |
2.3 |
ГОСТ 25336-82 |
1.3,2.3 |
ГОСТ 5823-78 |
1.3 |
ГОСТ 26313-84 |
1.2 |
ГОСТ 5848-73 |
2.3 |
ГОСТ 26671-85 |
1.2 |
ГОСТ 6709-72 |
1.3 |
ГОСТ 28498-90 |
1.3 |
ГОСТ 9805-84 |
1.3 |
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.