МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
ГОСТ
31664-
2012
МАСЛА РАСТИТЕЛЬНЫЕ И ЖИРЫ ЖИВОТНЫЕ
Метод определения состава жирных кислот в положении 2 в молекулах триглицеридов
(ISO 6800:1997, NEQ)
Издание официальное
Москва
Стенда ртмнформ 2013
ГОСТ 31664—2012
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандарт тизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила раз-работки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследова-тепьский институт жиров» Российской Академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИЖ Россельхоз-академии)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про* токол от 20 июля 2012 г. № 50-П)
За принятие проголосовали:
|
Краткое наименование страны по МК <ИСО 3100) 004-97 |
Код страны по МК (ИСО 3100) 004—97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
|
Армения |
AM |
Минэкономики Республики Армения |
|
Беларусь |
BY |
Госстандарт Республики Беларусь |
|
Киргизия |
KG |
Кыргызствндарг |
|
Россия |
RU |
Росстандарт |
|
Таджикистан |
TJ |
Твджикстандарт |
|
Узбекистан |
uz |
Узствндарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 июня 2013 г. № 348-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31664—2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.
5 8 настоящем стандарте учтены основные нормативные положения международного стандарта ISO 6600:97 Animal and vegetable fats and oils. Determination of the composition of fatty acids in the 2-position of the triglyceride molecules (Животные и растительные жиры и масла. Определение состава жирных кислот в положении 2 е молекулах триглицеридов).
Перевод с английского языка (еп).
Степень соответствия — неэквивалентная (NEQ).
Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 51464—99
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты».Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также е информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии е сети Интернет
© Стандартинформ.2013
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агенства по техническому регулированию и метрологии
ГОСТ 31664—2012
Содержание
1 Область применения……………………………………………1
2 Нормативные ссылки…………………………………………..1
3 Сущность метода……………………………………………..2
4 Условия проведения измерений……………………………………..2
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы…………..2
6 Подготовка к измерению…………………………………………3
7 Выполнение измерения………………………………………….4
в Обработка результатов измерений……………………………………5
9 Метрологические характеристики метода………………………………..5
10 Требования безопасности при проведении работ…………………………..6
11 Требования к квалификации оператора………………………………..6
Приложение А (обязательное) Приготовление липазы и проверка ее активности…………..7
in
ГОСТ 31664—2012
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МАСЛА РАСТИТЕЛЬНЫЕ И ЖИРЫ ЖИВОТНЫЕ Метод определения состава жирных кислот в положении 2 в молекулах триглицеридов
Vegetable oils end animal fats. Method for determination of the composition of fatty acids in the position 2
of the tngtycende molecules
Дата введения — 2014—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на растительные масла и животные жиры и устанавливает метод определения состава жирных кислот, которые находятся в положении 2 (р или среднем положе-нии) в молекулах триглицеридов в растительных маслах и животных жирах.
8 силу природных свойств активности панкреатической липазы метод применим только для жиров с температурой плавления ниже 45 вС.
Этот метод не может без ограничений применяться для всех жиров и масел, в частности, содержа’ щих значительные количества:
• жирных кислоте 12 и менее атомами углерода (например, кокосовое масло, пальмоядровое мао ло. молочный жир);
• жирных кислот с20и более атомами углерода и высокой степенью ненасыщенности (более четы* рех двойных связей) (например, рыбные жиры и жиры морских млекопитающих);
• жирных кислот, имеющих вторичные группы, содержащие кислород.
Примечание — Жирныекислотысдаойнымисвяэямиаположенииот(д -16)до<д -11) (например петро-зелиновая кислота) лишь в слабой степени подвергаются воздействию панкреатической липазы. Это может привести к искажению результатов.
2 Нормативные ссылки
8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 450—77 Кальций хлористый технический. Технические условия
ГОСТ 976—81 Маргарин, жиры для кулинарии, кондитерской и хлебопекарной промышленности. Правила приемки и методы испытаний
ГОСТ 2603—79 Ацетон. Технические условия
ГОСТ 3118—77 Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4328—77 Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 5471—83 Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 5848—73 Кислота муравьиная. Технические условия
ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 8285—91 Жиры животные топленые. Правила приемки и методы испытания
ГОСТ 9293—74 (ИСО 2435—73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия
ГОСТ 9805—84 Спирт изопропиловый. Технические условия
ГОСТ 18270—72 Кислота уксусная особой чистоты. Технические условия
Издание официальное
1
ГОСТ 31664—2012
ГОСТ 18300—87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 31683—2012 Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров жирных кислот
ГОСТ 31665—2012 Масла растительные и жиры животные. Получение метиловых эфиров жирных кислот
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен {изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Сущность метода
Метод включает нейтрализацию свободных жирных кислот, очистку испытуемой пробы с помощью колоночной хроматографии, частичный энзиматический гидролиз глицеридов, отделение 2-моноглице* ридов с помощью тонкослойной хроматографии и определение их жирнокислотного состава с помощью газовой хроматографии.
4 Условия проведения измерений
При подготовке и выполнении измерений в помещении лаборатории должны быть соблюдены сле
дующие условия:
— температура окружающей среды. *С………………………….от 15 до 30;
• относительная влажность воздуха, %…………………………не более 80:
— напряжение питающей сети. В………………………………. 220 ± 15:
♦ частота переменного тока. Гц…………………………………50±2.
5 Средства измерений, вспомогательное оборудование,
реактивы и материалы
Спирт изопропиловый по ГОСТ 9805. с объемной массой 95 % и 50 %.
Спирт этиловый по ГОСТ 18300, с объемной массой 95 % и 50 %.
Гексан по нормативному документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
Эфир петролейный с температурой кипения 30 *С—60 вС.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор молярной концентрации c(NaOH) = 0.1 моль/дмэ и c(NaOH) = 0.5моль/дм3.
Фенолфталеин, спиртовой раствор массовой долей 1 %.
Алюминия окисьактивированная нейтральная для хроматографии I степени активности, активированная перед использованием в течение 2 ч при 260 ‘С и хранящаяся в эксикаторе.
Азот по ГОСТ 9293. ос. ч.
Эфир этиповый. не содержащий перекисей.
Кислота соляная по ГОСТ 3118 концентрации c(HCI) = 6 моль/дм3.
Натрия холат. раствор массовой долей 0,1 %. пригодный для энзимов.
Кальций хлористый по ГОСТ 450. раствор концентрации 220 г/дм3.
Раствор буферный. 2-амино-2-{гидроксиметил)пропан-1.3-диол* молярной концентрации 1 моль/дм3; раствор доводят соляной кислотой до pH 8 по pH-метру. Раствор хранят при температуре 0 *С—4 *С и используют в течение 14 дней.
* Синонимы: трис(гидроксиметил)мвтиламин. трис(гидроксиметил)аминомвтан.
2
ГОСТ 31664—2012
Липаза панкреатическая активностью 8—20 ед/мг. Липазу хранят сухой в холодильнике. Перед использованием доводят порцию порошка до комнатной температуры.
Примечание — Липаза необходимой активности имеется а продаже. При необходимости она может быть получена и испытана а соответствии с методикой, приведенной в приложении А.
Ацетон по ГОСТ 2603.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Силикагель порошкообразный со связующим веществом для тонкослойной хроматографии.
2\ 71» Дихлорфлуоресцеин. спиртовой раствор индикатора массовой долей 0.2 %. Слабощелочная реакция достигается добавлением одной капли гидроокиси натрия молярной концентрации 1 моль/дм3 на 100 см3 раствора.
Кислота муравьиная по ГОСТ 5648 или Кислота уксусная поГОСТ 18270.
Реактивы поГОСТ 31663 и ГОСТ 31665.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104.
Баня водяная с терморегулятором, обеспечивающая нагрев до (40 ± 0.5) °С.
Колонка стеклянная для хроматографии внутренним диаметром 13 мм и длиной 400 мм, снабженная стеклянным пористым фильтром и пробкой.
Испаритель ротационный с колбой вместимостью 250 см3.
Трубка для пробулькивания азота.
Воронка делительная ВД-1(3)-500 ХС по ГОСТ 25336.
Колба К-1-25-14/23 ТС по ГОСТ 25336 с воздушным холодильником длиной приблизительно 1 м. Колба Кн-2-50-18(22) ТС по ГОСТ 25336.
Колба Кн-1-250-29/32 ТС по ГОСТ 25336.
Колба К-1-100-29/32 ТС по ГОСТ 25336.
Центрифуга.
Пробирки центрифужные стеклянные вместимостью 10 см3 со шлифом.
Встряхиватель вибрационный электрический.
Шприц для подкожных инъекций вместимостью 1 см3 с тонкой иглой.
Секундомер.
Камера хроматографическая для тонкослойной хроматографии с притертой стеклянной крышкой, пригодная для размещения стеклянных пластинок размером (200 х 200) мм.
Устройство для нанесения адсорбента на стеклянные пластинки и аппликатор.
Пластинки стеклянные размером (200 х 200) мм.
Микрошприц, обеспечивающий нанесение капель объемом 3—4 мм3.
Приспособление для опрыскивания пластинок раствором индикатора.
Микрошпатель.
Термостат, обеспечивающий температуру (103 ± 2) *С.
Лампа ультрафиолетовая для определения положения пятен на хроматографических пластинках, например, при длине волны 254 нм.
Фильтр стеклянный пористый 16 мкм—40 мкм.
Эксикатор, содержащий эффективный осушитель.
Аппаратура по ГОСТ 31663 и ГОСТ 31665.
Допускается применение другой аппаратуры и реактивов, локачестеуи техническим характеристикам не уступающих перечисленным выше.
6 Подготовка к измерению
6.1 Отбор проб Отбор проб
• растительного масла — поГОСТ 5471;
• жиров животных топленых — по ГОСТ 8285;
• маргаринов, жиров для кулинарии, кондитерской и хлебопекарной промышленности, спредов и топленых смесей — по ГОСТ 976.
3
ГОСТ 31664—2012
6.2 Подготовка испытуемой пробы
Если кислотностьпробы не болееЗ.0%, пробу очищают, пропуская ее череэокись алюминия по 7.2. Если кислотность более 3.0 %. вначале нейтрализуют пробу гидроокисью натрия в присутствии растворителя по 7.1. затем очищают ее. пропуская через окись алюминия.
6.3 Приготовление проявляющего растворителя
Готовят смесь, состоящую из 70 см3 гексана или петролейного эфира, 30 см3 этилового эфира и 1 см3 муравьиной кислоты с объемной массой не менее 98 % или уксусной кислоты.
7 Выполнение измерения
7.1 Нейтрализация пробы гидроокисью натрия
Растворяют (1011) г испытуемой пробы в 100 см3 гексана или легкого петролейного эфира и переносят раствор в делительную воронку. Добавляют 50 см3 изопропилового или этилового спирта, несколько капель раствора фенолфталеина и объем раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = 0.5 моль/дм3, эквивалентный содержанию свободных жирных кислот жира или масла, с избытком 0.5 %. Тщательно перемешивают в течение 1 мин и добавляют 50 см3 воды, вновь перемешивают и дают отстояться. После разделения слоев сливают нижний слой, содержащий мыло, и промежуточные слои (слизистые и нерастворимые вещества). Нейтрализованный раствор в воронке промывают последовательными порциями по 25 см3 50 %-ного раствора изопропилового или этилового спирта до тех пор. пока розовый цвет фенолфталеина не исчезнет. Переносят раствор в колбу ротационного испарителя и выпаривают большую часть растворителя под вакуумом. Высушивают масло при 30 ‘С—40 *С под вакуумом в токе азота до тех пор. пока растворитель не будет удален полностью.
7.2 Очистка пробы пропусканием через окись алюминия
Готовят суспензию 15 г активированной окиси ал юминия в 50 см3 гексана или легкого петролейного эфира и заполняют ею при постукивании хроматографическую колонку. Убедившись, что окись алюминия ровно заполнила колонку, оставляют слой растворителя на 1—2 мм выше верхнего уровня адсорбента. Растворяют 5 г испытуемой пробы в 25 см3 гексана или легкого петролейного эфира, нейтрализуют раствор, если необходимо, и осторожно приливают его в колонку. Собирают весьэлюат в круглодонную колбу вместимостью 100 см3. Удаляют большую часть растворителя выпариванием в ротационном испарителе под вакуумом, затем высушивают остаток при 30 вС—40 *С под вакуумом в токе азота до тех пор. пока растворитель не будет удален полностью.
7.3 Гидролиз триглицеридов
7.3.1 Взвешивают (0.110.01) гочищенной испытуемой пробы в пробирке для центрифугирования вместимостью 10 см3. Если проба не является жидкой при комнатной температуре, помещают пробирку в ячейку водяной бани при температуре 60 вС—65 “С. Если при этом проба не расплавится полностью, ее продолжают выдерживать в бане, но не более Юс. Вынимают пробирку из водяной бани и продолжают выполнять в быстрой последовательности испытания в соответствии с 7.3.2—7.3.5.
7.3.2 Добавляют к жидкой пробе предварительно взвешенные 20 мглипаэы и 2 см3 буферного раствора. Осторожно встряхивают и добавляют последовательно 0.5 см3 раствора холата натрия и 0.2 см3 раствора хлорида кальция.
Закрывают пробирку пробкой, осторожно встряхивают и сразу же помещают пробирку в ячейку водяной бани при 40 вС. выполняя ручное встряхивание втечение (6012)с. Все операции доначала ручного встряхивания должны быть выполнены за 30 с.
7.3.3 Извлекают пробирку из водяной бани и интенсивно встряхивают при 40 *С в течение (120 ± 2) с. используя встряхиеатель.
7.3.4 Немедленно после встряхивания приливают 1 см3 соляной кислоты и 1 см3 этилового эфира. Закрывают пробкой и интенсивно встряхивают на встряхивателе.
7.3.5 Центрифугируют содержимое пробирки и переносят органическую фазу в пробирку для испытания с помощью шприца. Если проба была твердой при комнатной температуре, повторяют экстракцию с еще 1 см3 этилового эфира и объединяют экстракты в пробирке для испытания.
7.4 Отделение 2-моноглицеридов
7.4.1 Подготовка пластинок
Тщательно очищают стеклянные пластинки 95 %-ным этиловым спиртом, гексаном или легким лет-ролейным эфиром и ацетоном до тех пор. пока жировые вещества не будут удалены полностью.
4
ГОСТ 31664—2012
Взвешивают 30 г силикагеля в конической колбе вместимостью 250 см3. Добавляют 60 см3 дистиллированной воды. Закрывают пробкой и интенсивно встряхивают в течение 1 мин. Сразу же вносят суспензию в аппликатор. Наносят на очищенные пластинки слой толщиной 0.25 мм. Оставляют лластинки высыхать не менее чем на 1 ч на воздухе. В любомслучае. подготовлены ли пластинки способом, описанным выше, или приобретены готовыми, активируют пластинки в термостате при 103 *С е течение 1 ч. Перед использованием пластинки охлаждают до комнатной температуры в эксикаторе. Для уменьшения скорости продвижения кислот пластинки с силикагелем пропитывают борной кислотой. Испытуемую смесь разделяют с помощью тонкослойной хроматографии как можно скорее. 8 связи с тем. что некоторые силикагели содержат органические вещества, которые могут оказывать влияние на результаты в процессе хроматографического анализа, очищают подготовленные пластинки. Для этого пластинки помещают в хроматографическую камеру с растворителем и дают растворителю подняться до верха пластинки. Допускается применение других хроматографических пластинок, по техническим характеристикам не хуже указанных.
7.4.2 Отделение 2-моноглицеридов
С помощью микрошприца на подготовленную пластинку наносят экстракт (7.3.5) каплями в виде сплошной полосы, проходящей на расстоянии 15 мм от нижнего края пластинки. Устанавливают пластинку в хроматографическую камеру, которую предварительно насыщают парами разделяющего растворителя. Закрывают камеру крышкой и осуществляют хроматографирование веществ на пластинке до тех пор. пока фронт растворителя не достигнет уровня на расстоянии 10 мм от верхнего края пластинки. Хроматографическое разделение проводят при температуре приблизительно 20 °С. Высушивают пластинку на воздухе при температуре 20 *С и опрыскивают ее раствором индикатора, используя приспособление для опрыскивания. Отмечают полосу моноглицеридов {R,- 0.035 приблизительно) в ультрафиолетовом свете и соскребают ее микрошпателем, избегая попадания в нее компонентов с линии старта. Если очищенные испытуемые пробы (7.2) были жидкими при комнатной температуре, помещают собранный силикагель в колбу для метилирования вместимостью 25 см3 и выполняют операции. описанные в 7.5. Если очищенные испытуемые пробы (7.2) были твердыми при комнатной температуре. переносят силикагель е коническую колбу вместимостью 50 см3, содержащую 15 см3 этилового эфира. Интенсивно встряхивают и переносят содержимое на стеклянный пористый фильтр. Промывают фильтр троекратно, используя каждый раз порцию по 15 см3 этилового эфира, и собирают фильтрат в колбу для выпаривания. Выпаривают эфирный раствор до объема 4 см3—5 см3 и переносят его в предварительно взвешенную круглодонную колбу вместимостью 25 см3. Затем выпаривают растворитель в токеазота. Взвешивают остаток. Полученное количество моноглицеридов должноколебаться от 10 % до 30 % от массы испытуемой пробы. Если результат иной, повторяют гидролиз триглицеридов (7.3) или проверяют активность липазы (см. приложение А).
7.5 Анализ 2-моноглицеридов с помощью газовой хроматографии
Готовят метиловые эфиры жирных кислот из моноглицеридов, подвергая собранный силикагель (или экстракт моноглицеридов из силикагеля) процедуре, установленной ГОСТ 31665. используя метод, пригодный для нейтральных жиров и масел. Проводят газохроматографический анализ метиловых эфиров по ГОСТ 31663.
8 Обработка результатов измерений
Рассчитывают отношение массы метилового эфира каждой жирной кислоты в положении 2. выраженное в процентах, к общей массе метиловых эфиров жирных кислот в 2-моноглицеридах.
Результаты записыеаютс точностью до первого десятичного знака.
9 Метрологические характеристики метода
9.1 Повторяемость
Расхождение между результатами двух независимых единичных определений, выполненных при использовании одного метода, на идентичном испытуемом материале, в одной лаборатории, одним аналитиком. на одном оборудовании, за короткий промежуток времени, не должно превышать при доверительной вероятности 0.95:
• 0.2 % (абс.) — при содержании определяемых компонентов менее 5 %;
• 3 % (отн.) от полученного значения, но не более 1 % (абс.) — при содержании определяемых компонентов. равном или более 5 %.
S
ГОСТ 31664—2012
9.2 воспроизводимость
Расхождение между результатами двух единичных определений, выполненных одним методом, на идентичном испытуемом материале, в разных лабораториях, разными аналитиками, на различном оборудовании, не должно превышать при доверительной вероятности 0.95:
• 0.5 % (абс.) — при содержании определяемых компонентов менее 5 %;
-10 % (отн.) от полученного значения, но не более 3 % (абс.) — при содержании определяемых компонентов, равном или более 5 %.
10 Требования безопасности при проведении работ
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соот* ветствиисГОСТ 12.1.004 ибытьоснащено средствами пожаротушения в соответствии сГОСТ 12.4.009.
11 Требования к квалификации оператора
Выполнение измерений, обработку и оформление результатов должен проводить специалист, имеющий высшее или среднее специальное образование, навыки работы на хроматографе и освоивший настоящий метод.
6
ГОСТ 31664—2012
Приложение А (обязательное)
Приготовление липазы и проверка ее активности
А.1 Приготовление липазы
Охлаждают 5 кг свежей свиной поджелудочной железы до О *С. Удаляют твердый жир и соединительную ткань, ее окружающую, и измельчают железу до получения жидкой пасты. Перемешивают эту пасту с 2.5 дм3 безеод-ногоацетона а течение 4—6ч на холодей затем центрифугируют. Экстрагируют остатокеще трижды таким же объемом ацетона: дважды — смесью вцетона и этилового эфира в соотношении 1 .1 по объему и дважды — этиловым эфиром. Высушивают остаток в течение 48 ч под вакуумом до образования порошка. Порошок хранят в холодильнике.
А.2 Проверкаактивностилипазы
Готовят масляную эмульсию, встряхивая смесь 165 см3гуммиврабика концентрации 1ООг/дм3.15 г дробленого льда и 20 см3 предварительно нейтрализованной пробы в течение 10 мин на пригодном для этой цели миксере. Наливают последовательно 10 см3 эмульсии. 0.3 см3 раствора холвта натрия (200 г/дм3) и 20 см3 дистиллированной воды в стакан вместимостью 50 см3. Помещают стакан в водяную баню при 37 ‘С (см. примечание 1). 8 стакан опускают электроды pH-метра и пропеллерную мешалку и. используя бюретку вместимостью 5 см3. приливают по каплям раствор гидроокиси натрия с (NaOH) ■ 0.1 моль/дм3 до тех пор. пока не будет достигнуто значение pH 8.5. Приливают соответствующий (см. примечание 2) и точно отмеренный объем 0.1%-ной водной суспензии анализируемого порошка лилвзы. Как только pH достигнет значения 8.3 по шкале pH-метра, включают секундомер и добавляют раствор NaOH так. чтобы значение pH 8.3 сохранялось. Записывают объем раствора щелочи, приливаемого каждую минуту в течение 10 мин. Наносят полученные данные на график, откладывая на оси X время в минутах и на оси /объем в сантиметрах кубических раствора щелочи, использованного для поддержания постоянного значения рн. Результат должен выражаться в виде прямой линии.
Примечания
1 Когда используют жидкое масло, гидролиз проводят при 37 4С. Однако для испытания уствнвеливают температуру 40 *С. позволяющую проанализировать жиры, имеющие температуру плавления до 45 *С.
2 Для испытания образцов используют такое количество суспензии липазы, при котором потребляется 1 см3 раствора щелочи за 4—5 мин. Такой результат обычно достигается при использовании 2 см3—5 см3 суспензии липазы.то есть от 1 добмглорошка.
Единица липазы определяется как количество энзима, которое требуется для высвобождения 1 мкмоль кислоты в минуту при 37 ‘С и pH 8.3.
Активность липазы А. выраженную в единицах липазы на миллиграмм использованного порошка, определяют по формуле
A-Z1. <А,>
т
где V— объем израсходованного раствора гидроокиси натрия, разделенный на время, рассчитанный по графику. см}/мин;
с— концентрация раствора гидроокиси натрия. ммоль/дм3(с * ЮО):
т — масса испытуемой пробы порошка липазы: используемая липаза должна иметь активность от 8 до 20 единиц липазы на миллиграмм.
7
ГОСТ 31664—2012
УДК 664.34.001.4:006.354 МКС 67.200.10 Н69 NEQ
Ключевые слова: масла растительные, жиры животные, газовая хроматография, метод испытания, условия определения, обработка результатов
Редактор UM. Максимова Технический редактор В.Н. Прусакова Корректор В.Е. Нестерова Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой
Сдано е набор 22.11.2013. Подписано а печать 27.11.2013. Формат 60-в4^£ Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 1.40 Уч.-иад. п. 1.00. Тираж 113 ом. Зах 1407.
ФГУП кСТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва, Гранатный пер.. 4. infoQgostinfo.iu
Набрано во на ПЭВМ.
Отпечатано а филиале ФГУП кСТАНДАРТИНФОРМ» — тип. «Московский печатник». 105062 Москва. Ляпин пер., б.
