МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
ГОСТ
32113-
2013
ПРОДУКЦИЯ ВИНОДЕЛЬЧЕСКАЯ
Метод определения массовой концентрации
лимонной кислоты
Издание официальное
Москва
Стенда ртмнформ 2013
ГОСТ 32113—2013
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандарт тизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила раз* работки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт пивоваренной, безалкогольной и винодельческой промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПБиВП Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 марта 2013 г. No 55-П)
За принятие проголосовали:
|
Краткое наименование страны по МК <ИСО 3166) 004- 97 |
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
|
Армения |
AM |
Минэкономики Республики Армения |
|
Беларусь |
BY |
Госстандарт Республики Беларусь |
|
Киргизия |
KG |
Кыргыэстандврт |
|
Молдова |
MD |
Молдоав-Ствндарт |
|
Россия |
RU |
Росстандарт |
|
Таджикистан |
TJ |
Твджикстандарт |
|
Узбекистан |
UZ |
Уэствндарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 5 июня 2013 г. № 145-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32113—2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2014 г.
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52391—2005
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок— в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования—на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии е сети Интернет
© Стандартинформ. 2013
В Российской Федерации настоящий стандартне может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
ГОСТ 32113—2013
Содержание
1 Область применения……………………………………………1
2 Нормативные ссылки…………………………………………..1
3 Требования безопасности………………………………………..2
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы………2
5 Отбор проб…………………………………………………3
в Подготовка к выполнению измерений………………………………….3
6.1 Условия выполнения измерений………………………………….3
6.2 Подготовка и отбор кювет………………………………………3
6.3 Приготовление рабочих растворов…………………………………3
6.4 Подготовка приборов………………………………………..4
7 Выполнение измерений………………………………………….4
7.1 Подготовка пробы………………………………………….4
7.2 Измерение оптической плотности………………………………….5
в Обработка результатов измерений……………………………………5
9 Контроль точности результатов……………………………………..6
9.1 Контроль повторяемости (сходимости)………………………………6
9.2 Контроль воспроизводимости……………………………………6
9.3 Контроль погрешности………………………………………..6
in
ГОСТ 32113—2013
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ ВИНОДЕЛЬЧЕСКАЯ Метод определения массовой концентрации лимонной кислоты
Wine production.
Method for determination of citric acid mesa concentration
Дата введения — 2014—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на винодельческую продукцию и устанавливает метод определения массовой концентрации лимонной кислоты в диапазоне от 3 до 2000 мг/дм3.
Метод основан на спвктрофотометрическом/фотометрическом определении количества окислен* кого в ходе ферментативных реакций никотикамид-адениндинуклеотида (НАД+), эквивалентного мае* совой концентрации лимонной кислоты.
Оптическую плотность измеряют в кювете номинальной толщиной 10 мм при длине волны 340 нм (максимум поглощения NADH) либо 334 или 365 нм — при использовании фотометра с прерывистым спектром.
2 Нормативные ссылки
8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.2.007.0—75 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.103—83 Система стандартов безопасности труда. Одежда специальная защитная, средства индивидуальной защиты ног и рук. Классификация
ГОСТ 908—2004 Кислота лимонная моногидрат пищевая. Технические условия ГОСТ 1770—74 (ИС0 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3769—78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия ГОСТ 4201—79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия ГОСТ 4328—77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 4517—87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе
ГОСТ 4529—78 Реактивы. Цинк хлористый. Технические условия
ГОСТ ИСО 5725-6—2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 17299—78 Спирт этиловый технический. Технические условия ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
Иэдвние официальное
1
ГОСТ 32113—2013
ГОСТ 25336—62 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26496—90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29169—91 (ИС0648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227—91 (ИСО 835*1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 31730—2012 Продукция винодельческая. Правила приемки и методы отбора проб
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего годе, и по соответствующим выпускам ежемесячно издаваемого информационного указателя за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется е части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Требования безопасности
3.1 Требования электробезоласности при работе с приборами —поГОСТ 12.2.007.0.
3.2 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
3.3 При выполнении анализов необходимо выполнять требования безопасности при работе с химическими реактивами согласно ГОСТ 12.4.103.
4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда,
реактивы и материалы
Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения при длине волны 340 нм. шириной полосы пропускания не более 5 нм; основная погрешность измерения коэффициента светопропускания не более 10.1 %; кварцевые или стеклянные кюветы номинальной толщиной 10 мм. При отсутствии спектрофотометра можно пользоваться фотометром с прерывистым спектром, позволяющим проводить измерения при длине волны). равной 334 нм или 365 нм.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ± 0,05 мг.
pH-метр с диапазоном измерения от 1 до 10 ед. pH; погрешность измерения—не более±0.05 ед. pH.
Секундомер с диапазоном измерения от 60 с до 30 мин; погрешность измерения — не более ±0.5 мин.
Пипетки по ГОСТ 29169 вместимостью 1.2.5.10 и 25 см3,1-го или 2-го класса.
Пипетки по ГОСТ 29227 вместимостью от 0,5 до 2 см3.1-го или 2-го класса.
Микропипетки вместимостью 5—50.100—1000 мкл.
Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 100.500 см3,1-го или 2-го класса.
Термометржидкостный стеклянный по ГОСТ28498сдиапазоном измеренияот 10°Сдо50 *С. цена деления 1 *С.
Гигрометр психрометрический.
Колба коническая по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см3.
Воронка химическая по ГОСТ 25336.
Стаканы химические по ГОСТ 25336 вместимостью 10 и 25 см3.
Цилиндры по ГОСТ 1770 вместимостью 50.100.250см3.
Палочка стеклянная или пластмассовая.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328. х. ч.
Кислота лимонная пищевая по ГОСТ 908. экстра.
Глицилглицин.
Цинк хлористый по ГОСТ 4529. х. ч.
Никотинамид-аденин-динуклеотид.
Малат-дегидрогеназа (МДГТ). раствор массовой концентрацией 5 мг/см3. активность 136 U (ЕС 1.1.1.37).
2
ГОСТ 32113—2013
Лактат-дегидрогеназа (ЛДГГ). раствор массовой концентрацией 5 мг/см3. активность 280 U (ЕС 1.1.1.27).
Цитрат-лиаэа (ЦЛ), раствор массовой концентрацией 5 мг/см3. активность 12 U (ЕС 4.1.3.6). Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769. х. ч.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Вода бидистиллированная по ГОСТ 4517.
Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201. х. ч.
Полиеинилпопипирролидон.
Бумага фильтровальная поГОСТ 12026.
Спирт этиловый технический по ГОСТ 17299.
Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.
5 Отбор проб
Отбор проб—по Г ОСТ 31730.
6 Подготовка к выполнению измерений
6.1 Условия выполнения измерений
При выполнении измерений необходимо соблюдать следующие условия:
– температура окружающей среды………………………..от 20 *С до 30 *С;
• относительная влажность воздуха, не более………………………..90 %;
• атмосферное давление……………………………. 630—800ммрт.ст.
6.2 Подготовка и отбор кювет
Кюветы, предназначенные для определения, моют 10 %-ным раствором соляной кислоты; затем трижды промывают дистиллированной водой и один раз этиловым спиртом. Не допускаются применение растворов щелочей, концентрированных кислот и механическая чистка кювет с помощью абразивных средств. Затем кюветы высушивают на фильтровальной бумаге под стеклянным стаканом при комнатной температуре.
Вылолняюттри параллельных измерения оптической плотности на спекгрофотометре/фотометре при длине волны 340 нм (334 нм или 365 нм). Для выполнения измерения используют только те кюветы, для которых выполняется условие <V, £0,005.
Для выполнения измерений на однокюветных спектрофотометрах/фотометрах используют одну и туже кювету.
6.3 Приготовление рабочих растворов
6.3.1 Приготовление раствора хлористого цинка (ZnCI2) массовой концентрацией 80 мг/ЮОсм3
8 мерную колбу вместимостью 100 см3 переносят 80 мг хлористого цинка, добавляют 10 см3 бидис-тиллированной воды, перемешивают до полного растворения. Затвмобъвм доводят до метки бидистил-лированной водой.
6.3.2 Приготовление раствора натрия гидроокиси молярной концентрацией cfNaOH)* *5моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 500 см3 наливают 200—250 см3 бидистиллированной воды. Затем постепенно, не допуская разогрева свыше 50 *С, вносят 100 г натрия гидроокиси. Закрывают колбу пробкой и перемешивают круговыми движениями до полного растворения щелочи. Раствор охлаждают до температуры 20 °С — 25 вС. доводят до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 3 мес.
6.3.3 Приготовление раствора сернокислого аммония молярной концентрацией с ((NH)2S04) * 3.2 моль/дм3
8 мерную колбу вместимостью 100 см3 лереносят42,28 г сернокислого аммония, добавляют 60 см3 бидистиллированной воды и перемешивают круговыми вращениями. Затем объем доводят до метки бидистиллированной водой.
Срок хранения раствора при комнатной температуре—не более 3 мес.
з
ГОСТ 32113—2013
6.3.4 Приготовление буферного раствора с pH в 7,8 ед. pH
В мерную колбу вместимостью 500 см3 переносят 7,13 гглицилглицина. добавляют 70 см3 бидис-тиллированной воды и перемешивают. Затем добавляют 13 см3 раствора натрия гидроокиси молярной концентрацией 5 моль/дм3. приготовленного поб.3.2.10 см3 раствора хлористого цинка, приготовленного по 6.3.1. и доводят объем до метки бидистиллированной водой.
Срок хранения раствора при температуре 4 *С — не более четырех недель. Еженедельно проверяют значение pH.
6.3.5 Приготовление раствора восстановленного никотинамид-аденин-динуклеотида молярной концентрацией с (NADH) * 6 10~3моль/дм3
В стакан вместимостью 25 см3 вносят 30 мг NADH. растворяют в 6 см3 бидистиллированной воды. Затем добавляют 60 мг углекислого кислого натрияи перемешивают.
6.3.6 Приготовление раствора малат-дегидрогеназы/лактат-дегидрогеназы (МДГГ/ЛДГГ)
В стакан вместимостью 10 см3 вносят микропипеткой 1 см3 раствора МД ГГ массовой концентрацией 5 мг/см3.0,4 см3 раствора сернокислого аммония молярной концентрацией 3,2 моль/дм3 (приготовленного по 6.3.3), 0.5 смэ раствора ЛДГТ массовой концентрацией ферментного препарата 5 мг/см3 и перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре минус 20 *С—не более четырех недель.
6.3.7 Приготовление раствора цитрат-лиазы молярной концентрацией с (ЦЛ) “ 5 мг/см3
В стакан вместимостью 10 см3 вносят 168 мг ЦЛ. Затем добавляют 1 см3 ледяной бидистиллированной воды и перемешивают.
Срок хранения раствора при температуре минус 20 *С—не более четырех недель.
6.3.8 Приготовление суспензии поливинилполипирролидона (ПВПП)
В стакан вместимостью 25 см3 переносят 0.2 г ПВПП. добавляют 10—15 см3 дистиллированной воды и перемешивают. Затем отстаивают в течение 15 мин и фильтруют через складчатый фильтр. Осадок. оставшийся на фильтре, используют для обесцвечивания красных вин.
Применение — Вместо приготовления рабочих рвстворов по 6.3.1—6.3.7 допускается использование готовых импортных растворов по качеству не хуже предусмотренных по 6.3.1—6.3.7.
6.4 Подготовка приборов
Подготовку спекгрофотомстра/фотометра и pH-метра к измерениям осуществляют в соответствии с руководствами по эксплуатации этих приборов.
Нулевое показание по шкале оптической плотности устанавливают по воздуху.
7 Выполнение измерений
7.1 Подготовка пробы
7.1.1 Удаление двуокиси углерода, содержащейся в вине и винном коктейле
Избыток двуокиси углерода удаляют в соответствии с порядком, установленным нормативными документами, действующими на территории государств, принявших стандарт.
7.1.2 Обесцвечивание красного вина
При анализе интенсивно окрашенных красных вин проводят обесцвечивание пробы. К 10 см3 вина, помещенного в коническую колбу вместимостью 50 см3, добавляют ПВПП. приготовленный по 6.3.8, смесь перемешивают в течение 2—3 мин, а затем фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Для измерения используют прозрачный или слегка окрашенный фильтрат.
7.1.3 Разбавление пробы
В зависимости от проведенной оценки значения массовой концентрации лимонной кислоты пробу разбавляют дистиллированной водой в соответствии с таблицей 1.
Таблице 1
|
Диапазон измерении массовой концентрации лимонной кислоты, ыг/ди3 |
Коэффициент разбавления К |
|
От 3 до 240 включ. |
1 |
|
Св. 240 • 850 » |
4 |
|
* 850*1250 * |
5 |
|
» 1250*2000 * |
10 |
ГОСТ 32113—2013
7.2 Измерение оптической плотности
8 кюветы с помощью пипетки и микропипетки дозируют растворы реактивов и пробу в количествах и в порядке, указанном в таблице 2.
Таблица 2
|
Наименование растворов |
Объем.см9 |
|
|
Контрольный раствор (4и) |
Испытуемый раствор (А1ПГ) |
|
|
Буферный раствор по 6.3.4 |
1.00 |
1.00 |
|
Раствор NADH по 6.3.5 |
0.10 |
0.10 |
|
Проба |
— |
0.20 |
|
Бидистиллированная вода |
2.00 |
1.80 |
|
Раствор МДГГ/ЛДГГ по 6.3.6 |
0.02 |
0.02 |
Растворы в кювете осторожно перемешивают стеклянной или пластмассовой палочкой и выдержи-вают в течение (5,0 ±0,5) мин.
Проводят измерение оптической плотности относительно воздуха контрольного (Д1К) и испытуемого (А1ПР) растворов с записью результата измерения до третьего знака после запятой.
Затем в растворы добавляют по 0.02 см3 раствора цитрат-лказы, приготовленного по 6.3.7. перемешивают и выдерживают в течение (5,010.5) мин. Повторно проводят измерение оптической плотности относительно воздуха контрольного (Д2К) и испытуемого (Д2ПР) растворов с записью результата измерения до третьего десятичного знака.
8 Обработка результатов измерений
8.1 Массовую концентрацию лимонной кислоты С, мг/дм3. вычисляют по формуле
С = «ДАК. (1)
где« = 488 мг/дм3 для измерений при >.= 334 нм; а – 479 мг/дм3 для измерений при >. – 340 нм: а = 887 мг/дм3 для измерений при 365 нм; д А — разность оптических плотностей, вычисленная по формуле (2);
К — коэффициент разбавления по 7.1.3.
8.2 Разность значений оптических плотностей вычисляют по формуле
= (Дщр “^2пр) – (Аж “ А2к>* (2)
где А,пр и Д2ПР — значения оптической плотности испытуемого раствора до и после реакции с цит-рат-лиаэой по 7.2;
А, к иД2К — значения оптической плотности контрольного раствора дои после реакции с цитрат-лиазой по 7.2.
Примечание — Если (А1И – А2К) имеет отрицательное значение, то его суммируют с (А1ПР – А2ПР). Определенная по формуле (2) разность значений оптических плотностей ДА. как правило, составляет не менее 0.100 и не более 0,600.8 противном случае изменяют коэффициент разбавления по 7.1.3.
Вычисления проводят до первого десятичного знака.
За результат анализа принимают среднеарифметическое значение двух результатов параллельных определений, округленное до целогочисла. абсолютное расхождение между которыми непревыша-ет предела повторяемости (сходимости) г.
Значения предела повторяемости (сходимости) г приведены в таблице 4. Результаты измерений считают приемлемыми при условии
(3)
|Х,-Х2|£г,
S
ГОСТ 32113—2013
где X,, Х2 — массовая концентрация лимонной кислоты в двух параллельных определениях.
Если условие (3) не выполняется, то проводят повторные измерения и проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) в соответствии с ГОСТ ИСО 5725*6 (пункт 5.2.2).
9 Контроль точности результатов
9.1 Контроль повторяемости (сходимости)
При контроле повторяемости (сходимости) абсолютное значение разности двух результатов параллельных определений, полученных в условиях повторяемости (на одной и той же пробе, в одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с использованием одного и того же оборудования, в пределах короткого промежутка времени), не должно превышать абсолютного предела повторяемости (сходимости) г, т. е. с вероятностью Р «0.95 должно выполняться условие (3).
9.2 Контроль воспроизводимости
При контроле воспроизводимости абсолютное значение разности двух результатов анализа одной и той же пробы, полученных в условиях воспроизводимости (в двух лабораториях, разными операторами, с использованием различного оборудования), не должно превышать предела воспроизводимости R. Значения R приведены в таблице 4. Результаты измерений считают приемлемыми при условии
!X,-x2|*r (4)
9.3 Контроль погрешности
При проведении контроля погрешности метода используют стандартный раствор лимонной кислоты лабораторного приготовления. Схема дозирования представлена в таблице 3.
Таблица 3
|
Наименование раствора |
Объем.см3 |
|||
|
Контрольный раствор |
Испытуемый реетеоо |
Стандартный раствор |
Стандартный раствор ♦ испытуемый раствор |
|
|
Буферный раствор по 6.3.4 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
1.00 |
|
Раствор NADH по 6.3.5 |
0.10 |
0.10 |
0.10 |
0.10 |
|
Пробе |
— |
0.20 |
— |
0.10 |
|
Стандартный раствор |
— |
— |
0.20 |
0.10 |
|
Бидистиллироввннвя воде |
2.00 |
1.60 |
1.60 |
1.80 |
|
Раствор МДГГ/ЛДГГ по 6.3.6 |
0.02 |
0.02 |
0.02 |
0.02 |
Растворы в кюветах осторожно перемешивают стеклянной или пластмассовой палочкой и выдерживают в течение (5.0 ± 0.5) мин. Проводят измерение оптической плотности Ах (для контрольного, испытуемого, стандартного и стандартного ♦ испытуемого растворов). Далее процедуру анализа продолжают в соответствии с 7.2.
Разность значений оптических плотностей вычисляют по формуле (2) и формулам
^пр ♦ стаид г (^1ПР * стенд “ ^2ПР * стана) “ Иж “ ^2к)- (5)
Астана ~ Hlcratu “^2стаид)” Иж ** ^2к)- (®)
Вычисляют степень повторного нахождения стандарта. %, по формуле
ш_2Д’У.<.»нд-А4100 (7)
Л4е»яна
Степень повторного нахождения должна находиться в интервале:
95%srtHs100 %.
6
ГОСТ 32113—2013
Диапазоны измерения массовых концентрацией лимонной кислоты и значения показателей точности метода измерений при Р-0.95 приведены в таблице 4.
Таблица 4
|
Диапазон измерений концентраций лимонной кислоты, ыг/ди3 |
Предел повторяемости (сходимости) г. мг/дм3 |
Предел воспроизводимости R, мг/дм3 |
Границы относительной погрешности t А. % |
|
От 3 до 400 включ. |
14 |
39 |
5 |
|
Се.400 к 2000 » |
32 |
65 |
4.5 |
7
ГОСТ 32113—2013
УДК663.5.001.4:006.354 МКС67.160.10 Н79
Ключевые слова: винодельческая продукция, лимонная кислота, ферментативные реакции, спектрофотометрический метод, фотометрический метод, требования безопасности, выполнение измерений, обработка результатов, контроль точности результатов
Редактор М £. Никулина Технический редактор 8.Н. Пруеаяоаа Корректор ЕМ’ Дульнова Компьютерная верстка А.Н. Зопотарввой
Сдано в набор 11.11.2013. Подписано а печать 24.12.2013. Формат 60 >04^ Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 1.40. Уч.-иэд. л. 0.95 Тирам 123 экз. Зак. 1512.
. 123005 Москва. Гранатный пер.. 4.
Набрано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ* на ПЭВМ.
Отпечатано в филиале — тип. «Московский печатник», 106002 Москва. Лялин пер.. 0.
Изменение Ns 1 ГОСТ 3211$—2013 Продукция винодельческая. Метод определения массовой кон* центрации лимонной кислоты
Принято Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (прото* кол № 47—2015 от 18.06.2015)
Зарегистрировано Бюро по стандартам МГС Ns 11113
За принятие изменения проголосовали национальные орга ны по стандартизации следующих госу* дарсте: AM. KG. KZ (коды альфа-2 по МК (ИСО 3166) 004]
Дату введения в действие настоящего изменения устанавливают указанные национальные органы по стандартизации”
Наименование стандарта изложить в новой редакции:
«Продукция ал когольная и сырье для ее производства. Ферментативный метод определения массовой концентрации лимонной кислоты
Alcoholic products and raw materials for their production. Enzymatic method for determination of citric acid mass fraction».
Раздел 1 изложить в новой редакции:
«1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на вина, еиноматериалы. игристые вина (шампанское), винные напитки и сырье для их производства (далее — продукт) и устанавливает ферментативный метод определения массовой концентрации лимонной кислоты в указанных продуктах. Диапазон измерений—от 0,01 до 2.00 г/дм3».
Раздел 2 дополнить ссылками:
«ГОСТ OIMLR 76-1—2011 Госуд арственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания ГОСТ 3118—77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 5962—2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 32095—2013 Продукция алкогольная и сырье для ее производства. Метод определения объемной доли этилового спирта»;
ссылку на ГОСТ ИСО 5725*6—2003 дополнить знаком сноски: *; дополнить сноской — *:
«’ На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике»;
исключить ссылки:
«ГОСТ 17299—78 Спирт этиловый технический. Технические условия ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические условия».
РЯ.ЯДЙП 4 ПйрП.К1Й. ятлрпй абтяцк» ияппжмтк я ипалй редакции
«Спектрофотометр с шириной спектральной полосы не более 10 нм для измерений при длинах волн 334. или 340. или 365 нм. с пределами допускаемых значений абсолютной погрешности при измерении коэффициента пропускания* 1 % (кюветы иэ оптического стекла или полимерных материалов с толщиной поглощающего свет слоя 1 см).
8есы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76*1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности ± 0,001 г.»;
пятый, шестой абзацы изложить в новой редакции:
«Пипетки с одной меткой 1-2*1. 1*1*1, 1-2*2. 1-1*2. 1-2-5. 1*1*5. 1*2*10. 1*1*10. 1-2*25. 1-1-25 по ГОСТ29169.
Пипетки градуированные 1-1-1-0.5; 1-1-2-0.5:2*1*1 *0.5;2*1*2*0,5;2*1*1*0.5; 1-1-1-1; 1-1-2-1:2-1-1-1;2-1-2*1:2-1-1-1; 1-1-1-2; 1-1*2*2; 2-1-1*2;2-1-2-2; 2-1-1-2:1-1-1-5:1-1-2 *5; 2-1-1-5; 2*1*2*5:2*1*1*5 поГОСТ 29227.»; восьмой абзац изложить в новой редакции:
«Колбы мерные 1-100-2.2-100*2.3-100*2.1-500*2.2*500*2.3*500*2 поГОСТ 1770.»: одиннадцатый — четырнадцатый абзацы изложить в новой редакции:
«Колбы Кн*1*50, Кн-2-50 по ГОСТ 25336.
‘Дата введения в действие на территории Российской Федерации — 2016—01—01.
1
(Продолжение Изменения №1 к ГОСТ32113—2013)
Воронка В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.
Стаканы В-1-10ТС, Н-1-10ТС, 8-1-25 ТС. Н-1-25 ТС по ГОСТ 25336.
Цилиндры 1-50-2.1 -100-2.1-250-2 по ГОСТ 1770.»; восемнадцатый абзац изложить в новой редакции:
«глицилглицим. препарат массовой долей не менее 99 % основного вещества»; двадцатый—двадцать третий абзацы изложить а новой редакции:
«Никотинамидадениндинуклеотид восстановленный (НАДН). препарат массовой долей основного вещества не менее 90 %.
L-малатдегидрогеназа (L-МДГ). «ферментативная активность не менее 136 Е (ЕС 1.1.1.37). L-лактатдегидрогеназа (L-ЛДГ), ферментативная активность не менее 260 Е (ЕС 1.1.1.27). Цитратлиаза (ЦЛ), ферментативная активность не менее 12 Е (ЕС 4.1.3.6).»; двадцать восьмой абзац изложить в новой редакции:
« Поливинил полипирролидон (ПВПП)»:
предпоследний, последний абзацы изложить в новой редакции:
«Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ 5962.
Кислота соляная по ГОСТ 3118. х.ч>; дополнить абзацем (после последнего):
«Допускается применение средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также посуды, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных».
Подраздел 6.2. Первый абзац после слов «соляной кислоты» дополнить словами: «приготовленной по ГОСТ 4517»;
второй, третий абзацы исключить.
Пункт 6.3.1 дополнить абзацем:
«Срок хранения раствора лри комнатной температуре — не более 1 мес».
Пункт 6.3.5. Наименование изложить в новой редакции:
«Приготовление раствора иикотинамидадениндинуклеотида восстановленного»;
первый абзац. Заменить обозначение; «NADH» на «НАДН».
Пункт 6.3.6. Наименование изложить в новой редакции:
«Приготовление раствора Ь-малатдегидрогеназыЛ.-лактатдегидоогеназы»: первый абзац. Заменить обозначения: «МДГГ» на* L-МДГ», «ЛДГГ»на «L-ЛДГ».
Пункт 6.3.7. Наименование изложить в новой редакции;
«Приготовление раствора цитратлиазы»:
первый абзац. Заменить значение: «168 мг» на «50 мг».
Пункт 6.3.8 изложить в новой редакции:
«6.3.8 Приготовление контрольного раствора лимонной кислоты
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят от 0,200 до 0,500 г лимонной кислоты и доводят до метки раствором этилового ректификованного спирта объемной долей 10 %.
Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 6 мес».
Пункт 6.4. Первый абзац. Исключить слово: «/фотометра».
Пункты 7.1.1,7.1.2 изложить в новой редакции:
«7.1.1 Удаление диоксида углерода (двуокиси углерода)
Пробы продуктов, насыщенных диоксидом углерода, предварительно дегазируют. Избыток диоксида углерода удаляют в соответствии с ГОСТ 32095 (пункт 6.1).
7.1.2 Обесцвечивание интенсивно окрашенных проб продуктов
Интенсивно окрашенные красные пробы продуктов предварительно подвергают обесцвечиванию с помощью ПВПП.
В стакан вместимостью 25 см3 вносят 0.2 г ПВПП. добавляют 10—15 см3 дистиллированной воды и перемешивают. Затем отстаивают в течение 15 мин и фильтруют через бумажный складчатый фильтр из фильтровальной бумаги по ГОСТ 12026. Осадок, оставшийся на фильтре, переносят е коническую колбу вместимостью 50 см3, добавляют 10 см3 пробы продукта, перемешивают в течение двух-трех минут, а затем фильтруют че рез бумажный складчаты й фильтр из фильтровальной бумаги по Г ОСТ 12026. Полученный обесцвеченный фильтрат используют для дальнейших определений».
2
(Продолжение Изменения 149 1 к ГОСТ32113—2013)
Пункт 7.1.3. Таблицу 1 изложить в новой редакции:
Таблица 1
|
Диапазон измерений массовой |
Коэффициент разбавления |
|
концентрации лимонной кислоты, г/ды1 |
К |
|
От 0,01 ло 0.24 включ. |
1 |
|
Св. 0.24 в 0.85 » |
4 |
|
» 0.85 в1.25 » |
5 |
|
в 1.25 в 2.00 » |
10 |
Пункт 7.2. Таблица 2. Заменить обозначения и слово: «Л» на «О», «NADH# на «НАДН», «МДГТУЛДГТ» на «ЬМДПЬ-ЛДГ». «Контрольный» на «Холостой»:
предпоследний, последний абзацы. Заменить обозначение: «А» на «О»:
последний абзац после слов «в растворы» дополнить словами: «находящиеся в кюветах.».
Подразделы 8.1.8.2 изложить в новой редакции:
«8.1 Массовую концентрацию лимонной кислоты С. г/дм3, вычисляют лоформуле
_ MV^F-ЛО с s e-tf-Vf-mOO’
где М — молярная масса лимонной кислоты, равная 192.1 г/моль;
V, — общий объем раствора в кювете, равный 3,12 см3 (см. таблицу 2):
F — коэффициент предварительного разбавления пробы;
ДО — разность значений оптических плотностей, вычисляемая ло формуле
*D = (Dtnp-D3np)-(Dtx-D2Xl (2)
где 01Пр и 0ЗПр —значения оптической плотности раствора с пробой продукта до и после добавления раствора МДГГ7ЛДГТ (см. 6.3.6);
0,х и D„ — значения оптической плотности холостой пробы до и после добавления раствора ЬМДГГ/1.-ДГГ(см. 6.3.6);
е — молярный коэффициент поглощения НАДН. (дм3 – ммоль ‘ см’1):
• при 340 нм —6,30;
• при 365 нм — 3,40;
• при 334 нм — 6,18:
d — толщина поглощающего свет слоя кюветы, равная 1 см;
/г — ооъем пробы продукта, равный и.20 см5 (см. таблицу 2);
1000 — коэффициент пересчета ммоль в моль.
Примечание — Если (0,х — D3%) имеет отрицательное значение, го его суммируют с <01ПР — 02ПР). Определенная разность значений оптических плотностей ЛО. как правило, составляет не менее 0.100 и не более 0.800. В противном случае изменяют коэффициент разбавления по 7.1.3.
82 За результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, абсолютное расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (сходимости) г.
Результаты измерений считают приемлемыми лр>и условии
|С, – С2| £ 0,01 г С, (3)
где С,. С2 —результаты двух параллельных определений массовой концентрации лимонной кислоты. г/дм3:
С —среднеарифметическое значение двух параллельных определений массовой концентрации лимонной кислоты, г/дм3:
г — предел повторяемости (сходимости), приведенный в таблице 2а. %.
Если условие (3) не выполняется, то проводят повторные измерения и проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости) в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-6 (подраздел 4.2)».
3
(Продолжение Изменения 149 1 к ГОСТ32113—2013)
Раздел 8 дополнить подразделом 8.3:
«8.3 Результат определений в документах, предусматривающих его использование, представляют в
виде
С ±0,01 б С. при Р- 0,95.
где с — среднеарифметическое значение результатов л определений, признанных приемлемыми ло 8.2. г/дм3;
±5 — границы относительной погрешности измерений (см. таблицу 2а). %.
Таблица 2а
|
Диапазон намерений массовой •оми.ентрации лимонной кисл-оты. «/дм* |
Л редел повторяемости (сходимости) г. Ч, при Р ■ 0.65 |
Предел воспроизводимости R. Ч. при Р * 0,65 |
Границы относительной потрешио-сти 1 5.%. при Р « 0,95 |
|
От 0.01 до 2.00 включ. |
5 |
7 |
5 |
Если содержание лимонной кислоты выходит за пределы границы диапазона из-мерений. приводят следующую запись в журнале: «Массовая концентрация лимонной кислоты менее 0.01 г/дм3 (более 2.00 г/дм3)».
Пункт 9.2. Заменить слова: «анализа одной и той же пробы» на «определений в одной и той же пробе»: «в таблице 4» на «в таблице 2а».
Пункт 9.3. Первый, второй абзацы. Заменить слово: «стандартный» на «контрольный» (3 раза): таблицу 3 изложить в новой редакции:
Таблица 3
|
Наименоааии е раствора |
Объем, см’ |
||
|
Контроль ный раствор |
Проба |
Контрольный раствор » проба |
|
|
Буферный раствор по 6.3.4 |
1.00 |
||
|
Раствор НАДН по 6.3.5 |
0.10 |
||
|
Проба |
— |
0.20 |
0.10 |
|
Контрольный раствор |
0.20 |
— |
0.10 |
|
Бпдоыгм тирован йен виде |
1.80 |
||
|
Раствор ЬМДГ/1_-ЛДГ по 6.3.6 |
0.02 |
формулу 5 изложить в новой редакции; дополнить экспликацией:
«д£)пр. КО(ГТ = (01ПР. конт 02ПР. конт) — ^гх)
(5)
где £>щр. конт и02Пр-» конт —значения оптической плотности смеси контрольного раствора с пробой
продукта до и после добавления раствора МДГТ/ЛДГТ (см. 6.3.6);
0,х и Djx — значения оптической плотности холостой пробы до и после добавления раствора L-МДГГУЬДГГ (см. 6.3.6).»; формулу 6 изложить в новой редакции; дополнить экспликацией:
«ДОконт г (0(конг —^гконг) — (D«x *“* ®2х)- (6)
где 0)КОНТ и £?аюнт — значения оптической плотности контрольного раствора до и после добавления раствора МДГГ/ЛДГГ (см. 6.3.6).»;
формулу 7 изложить в новой редакции; дополнить экспликацией:
«ПН в
1Q0 (д£>пр< хонт – АРконт) 2 ДОконт
(7)
4
(Продолжение Изменения №1 к ГОСТ32113—2013)
где Д0ПР„ конт — значение разности оптических плотностей, найденное по формуле (5); д£>конт — значение разности оптических плотностей, найденное по формуле (в).»; последний абзац и таблицу 4 исключить.
Библиографические данные. Ключевые слова изложить в новой редакции:
«продукция алкогольная и сырье для ее производства, лимонная кислота, массовая концентрация, ферментативный метод. L-малатдегидрогенаэа, Ьлактатдегидрогеназа. цитратлиаза. полиеинилполилир-ролидон, никотинамидадениндинуклвотид восстановленный».
(ИУС Ne 11 2015 г.)
5
