МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
(МГС)
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
(ISC)
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ
СТАНДАРТ
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ
И КОРМОВ для животных
Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
(ISO 7218:2007, ЮТ)
Издание официальное
ГОСТ
ISO 7218 — 2011
|
Москва Стандартинформ 2013 |
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 — 92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2 — 2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Российской академии медицинских наук
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол №40—2011 от 29 ноября 2011 г.)
|
За принятие проголосовали: |
|||||||||||||||
|
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. № 1477-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 7218-2011 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2013 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 7218:2007 Microbiology of foods and animal feed. — General requirements and guide for microbiological research (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и руководство по микробиологическим исследованиям).
Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.
Степень соответствия — идентичная (ЮТ).
Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТР ИСО 7218-2008
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе «Национальные стандарты».
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Национальные стандарты», а текст изменений — в информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты»
©Стандартинформ, 2013
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
II
порошковое мыло или другое дезинфицирующее средство, поступающее из дозатора, поддерживаемого в чистом состоянии. Для сушки рук следует использовать одноразовые бумажные или матерчатые салфетки или полотенца. Эти предосторожности относятся как к персоналу лаборатории, так и посетителям.
e) При работе с открытыми пробами, питательными средами и при посеве материала не допускается разговаривать, кашлять и т. д.
f) Люди, имеющие инфекционные заболевания кожи или страдающие заболеваниями кожи, должны предпринимать меры предосторожности, если микроорганизмы от них способны заразить образцы, что может отразиться на результатах испытаний.
д) В лаборатории нельзя принимать пищу, пить, оставлять пищевые продукты для личного потребления в лабораторных холодильниках или морозильных камерах.
h) Запрещается осуществлять пипетирование ртом.
5 Аппаратура и оборудование
5.1 Общие положения
В соответствии с установившейся лабораторной практикой всю аппаратуру и оборудование содержат в чистоте и в хорошем рабочем состоянии. Перед использованием оборудование следует проверить в соответствии с инструкцией. В процессе работы оборудование периодически проверяют по определенным характеристикам, указанным в соответствующих инструкциях.
При необходимости оборудование и контрольно-измерительные приборы калибруют в соответствии с действующими национальными стандартами. Выполняют также повторную калибровку и необходимые промежуточные поверки, а проведенные процедуры и результаты калибровок и проверок документируют.
Оборудование регулярно проверяют и проводят сервисное обслуживание, чтобы обеспечить безопасность и пригодность его к использованию. Оборудование проверяют согласно рабочим условиям и точности, требуемой для получения результатов.
Частота калибровки и проверок каждой единицы оборудования в большинстве случаев должна определяться каждой лабораторией в зависимости от типа оборудования и уровня активности лаборатории и в соответствии с инструкциями изготовителя оборудования. В ограниченном числе случаев частота калибровок и проверок увеличивается, если это необходимо для эффективной деятельности лаборатории.
Аппаратуру и оборудование следует сконструировать и установить таким образом, чтобы облегчить работу персоналу и обеспечить выполнение технического обслуживания, очистки, дезактивации и калибровки.
Все неопределенности измерений, приведенные в данном разделе, связаны с рассматриваемой здесь аппаратурой и оборудованием, но не с методом анализа в целом.
В этом разделе установлены требования, предъявляемые к точности измерительного оборудования. Они основаны на практической допустимости отклонений, позволяющей гарантировать контроль оборудования в рабочей деятельности. Установленная точность связана с метрологической неопределенностью прибора.
У приборов, контролирующих температуру, следует проверить стабильность и равномерность распределения температуры перед началом использования и после любого ремонта или их модификации, которые могут влиять на достоверность температурного контроля.
5.2 Бокс биологической безопасности для микробиологических исследований
5.2.1 Описание
Бокс биологической безопасности для микробиологических исследований (далее бокс) — это рабочее помещение, оснащенное установкой для горизонтального и вертикального ламинарных потоков воздуха, предназначенной для удаления пыли и других частиц из воздуха, в том числе микробов.
Максимально допустимое количество частиц в кубическом метре с размером больше или равным 0,5 мкм представляет класс устранения пыли из защитного кабинета с очисткой воздуха. Для кабинетов, используемых в микробиологии пищевых продуктов, количество частиц не должно быть выше 4000 в кубическом метре.
Кабинеты для использования в лабораториях микробиологии пищевых продуктов разделяются на четыре типа:
а) Боксы биологической безопасности класса I — это открытые спереди безопасные вытяжные шкафы, защищающие оператора и окружающую среду, но не защищающие продукт от загрязнения извне.
6
ГОСТ ISO 7218-2011
Потенциально инфицированные аэрозоли будут циркулировать внутри бокса и затем поглощаться фильтром. Отфильтрованный воздух затем поступает в атмосферу; если этого не происходит, воздух должен пройти через два сухих воздушных фильтра (НЕРА), установленные последовательно. Боксы биологической безопасности класса I не допускаются для работы с микроорганизмами 2-й группы патогенности из-за трудностей в поддержании и обеспечении соответствующей безопасности оператора.
b) Боксы биологической безопасности класса II защищают образец, оператора и окружающую среду. В них профильтрованный воздух циркулирует, а часть выделяется в атмосферу и заменяется воздухом через рабочее отверстие. Таким образом обеспечивается защита оператора. Эти боксы подходят для работы с патогенами 2-й группы патогенности.
c) Ламинарные боксы с горизонтальным оттоком воздуха защищают работу от загрязнения, но выносят любые аэрозоли на лицо оператора. Поэтому они не могут использоваться для работы с инокулируе-мыми культурами или для приготовления культуры ткани.
d) Ламинарные кабинеты с вертикальным потоком воздуха защищают продукт при помощи вертикального ламинарного потока воздуха, профильтрованного через фильтр НЕРА. Они также защищают оператора при помощи использования внутреннего рециркулированного воздуха. Они особенно подходят для обеспечения стерильной окружающей среды при работе со стерильными продуктами и для защиты оператора при работе с порошками.
Если это определено национальными регламентами, боксы биологической безопасности используют для любых видов работы с патогенными микроорганизмами и контаминированными порошками.
В боксах биологической безопасности не допускается использовать газовые горелки или установки для сжигания отходов. В боксах применяют одноразовое оборудование (бактериологические петли, пипетки и т. д.)
Примечание — Газовую горелку применяют при условии создания маленького пламени таким образом, чтобы не нарушить поток воздуха.
5.2.2 Использование
В боксах биологической безопасности не допускается наличие оборудования, которое не применяется в работе.
Все необходимое размещают до начала работы внутри бокса, чтобы свести к минимуму количество движений рук внутри и вне рабочей зоны. Расположение оборудования и материалов должно быть таким, чтобы свести к минимуму нарушение потока воздуха в рабочей зоне.
Операторы должны быть обучены правильному использованию боксов, чтобы обеспечивать как их безопасность, так и сохранность образца или культуры микроорганизмов.
5.2.3 Очистка и дезинфекция
Рабочую зону очищают и обеззараживают после использования с помощью соответствующего, не обладающего коррозийными свойствами дезинфицирующего средства, руководствуясь инструкцией изготовителя. Регулярно обследуют защитные предфильтры проволочных сеток и вытирают их чистой, пропитанной дезинфицирующим средством тканью.
Для ламинарных шкафов с очисткой воздуха наружную часть фильтра необходимо регулярно очищать под вакуумом таким образом, чтобы не повредить фильтрующую среду.
Боксы биологической безопасности должны окуриваться перед заменой фильтра или плановым обслуживанием.
После очистки бокса для обеззараживания можно использовать ультрафиолетовые (УФ) лампы. УФ лампы регулярно очищают или заменяют в соответствии с инструкциями изготовителя.
5.2.4 Техническое обслуживание и контроль
Необходимо использовать боксы биологической безопасности, которые предназначены для применения в лаборатории в соответствии с существующей окружающей средой.
Квалифицированный оператор должен проверять эффективность бокса биологической безопасности при получении и затем с регулярными интервалами, как рекомендует изготовитель, а также после любого ремонта или модификации.
Следует периодически выполнять проверку чистоты рабочей поверхности и стен бокса от любого микробного загрязнения.
Необходимо периодически осуществлять проверку числа микроорганизмов, циркулирующих в воздухе во время работы фильтров, с помощью обычного оборудования. Например, экспонируя несколько
7
открытых чашек Петри, содержащих неселективную агаровую культуральную среду (например РСА), в каждом кабинете в течение 30 мин. Допускается использовать другие методы.
5.3 Весы и гравиметрические разбавители
5.3.1 Использование и неопределенность измерения
Весы используют для взвешивания испытуемой пробы, компонентов питательных сред и реактивов. Кроме того, весы допускается использовать для измерений объемов разведенной жидкости с помощью определения массы.
Гравиметрические разбавители — это электронные инструменты, состоящие из весов и программируемого дозатора жидкости, который применяют для приготовления исходных суспензий проб. В их функции входит добавление разбавителя к первичной пробе в определенном отношении. Пробу взвешивают, далее добавляют разбавитель для получения определенного объема, чтобы получить достаточное разведение для требуемого отношения (например, 9 :1 для десятикратных разведений).
Лаборатория микробиологии пищевых продуктов должна быть оборудована весами требуемого диапазона с требуемой неопределенностью для взвешивания различных продуктов.
Если нет других указаний, максимальная допустимая погрешность — не более 1 % при взвешивании образцов для анализа.
Оборудование устанавливают на устойчивую горизонтальную поверхность и с защитой от вибраций и сквозняков.
5.3.2 Очистка и обеззараживание
Весы очищают и дезинфицируют после каждого использования или после проливания (рассыпания) при взвешивании с помощью подходящего некоррозирующего дезинфицирующего средства.
5.3.3 Проверка показателей и калибровка
Обученный оператор должен регулярно проверять рабочие характеристики системы взвешивания во время использования и после очистки с помощью контрольных разновесов. Проверку весов проводят по всему диапазону, частота проверки зависит от интенсивности использования.
Контрольные разновесы могут быть проверены также непосредственно после калибровки весов.
5.4 Гомогенизаторы, смесители и миксеры
5.4.1 Описание
Это оборудование используется для получения исходной суспензии из испытуемой пробы для анализа нежидких продуктов.
Необходимо использовать следующую аппаратуру:
— перистальтический смеситель (stomacher) со стерильными пакетами, возможно с устройством для регулирования скорости и таймером;
— ротационный гомогенизатор (блендер), способный создавать скорость от 8000 до 45000 об/мин включительно, со стерилизуемыми стеклянными или металлическими флаконами, закрываемыми крышками;
— вибрационный миксер (вибратор) со стерильными пакетами или
-другая система гомогенизации эквивалентной эффективности.
В некоторых случаях перемешивание может быть выполнено вручную с использованием стерильных стеклянных бусинок, имеющих соответствующий диаметр (приблизительно 6 мм; см. ISO 6887-2 — ISO 6887-4 и ISO 8261).
5.4.2 Применение
Обычно рабочее время гомогенизатора перистальтического типа составляет от 1 до 3 мин (см. ISO 6887-2 — ISO 6887-4 и ISO 8261 для конкретных пищевых продуктов).
Для некоторых видов пищевых продуктов эту аппаратуру использовать нельзя:
— продуктов, способных проколоть пакет (присутствие острых, твердых или сухих частиц);
— продуктов, которые трудно гомогенизировать из-за их структуры (например, колбаса типа салями).
Ротационный гомогенизатор должен использоваться в таком режиме, чтобы общее количество оборотов составляло от 15000 до 20000 об/мин включительно. Даже при использовании самого малого количества оборотов продолжительность работы не должна превышать 2,5 мин.
ГОСТ ISO 7218-2011
Вибрационный миксер можно использовать для большинства пищевых продуктов, включая твердые или сухие изделия. Обычное время работы составляет от 0,5 до 1 мин. Если микроорганизмы расположены глубоко внутри клейкой структуры продукта, образец перед обработкой следует разрезать на маленькие кусочки.
Стеклянные бусинки применяют для подготовки исходных суспензий контролируемых вязких или густых продуктов, в частности молочных продуктов (см. соответствующие стандарты на конкретные методы испытаний).
5.4.3 Очистка и обеззараживание
Перистальтические гомогенизаторы и вибрационные миксеры моют и обеззараживают после каждого применения, а также после любого разрыва пакета или протекания.
Ротационные гомогенизаторы моют и стерилизуют после каждого применения.
5.4.4 Техническое обслуживание
Контроль и техническое обслуживание оборудования — в соответствии с инструкциями изготовителя.
5.5 рН-метр
5.5.1 Описание
pH-метр применяют для измерения при определенной температуре разности потенциалов между измеряющим электродом и электродом сравнения, погруженными в продукт. pH-метр должен обеспечивать измерение с точностью до ± 0,05 единицы pH, а его разрешение составлять 0,01 единицы pH.
pH-метр должен быть оснащен ручным или автоматическим определителем температуры.
Примечание — Измерительный электрод и электрод сравнения обычно соединяют в одну систему электродов.
5.5.2 Использование рН-метра
pH-метр используют для измерения значения pH питательных сред и реактивов, а также для проверки их качества после стерилизации.
Прибор может также использоваться для измерения значений pH образцов и суспензий образцов. Использование pH-метра предусматривают в стандарте на конкретный анализируемый продукт, в котором определены условия для измерения значения pH и условия получения нужного значения pH.
pH-метр регулируют в соответствии с инструкцией изготовителя при стандартизированной температуре 25 °С. Значение pH учитывают после того, как стабилизируется показание. Значение pH записывают с точностью до двух знаков после запятой.
Примечание — Показание можно считать стабильным, когда значение pH, измеренное в течение 5 с, изменяется не более чем на 0,02 единицы pH. При использовании электродов в хорошем состоянии равновесие обычно достигается в пределах 30 с.
5.5.3 Проверка и контрольное измерение
pH-метр проверяют в соответствии с инструкцией изготовителя, используя не менее двух, а лучше трех стандартных буферных растворов, ежедневно перед началом работы. При этой проверке определяют максимально допустимые погрешности в зависимости от применения.
Буферные растворы должны иметь значения pH, определяемые с точностью до двух знаков после запятой при температуре измерения (pH 7,00, pH 4,00 и/или pH 9,0 при 25 °С в соответствии с инструкцией изготовителя). Измеряемое значение pH должно находиться между значениями pH стандартных растворов.
После проверки pH-метра с двумя определенными стандартными буферными растворами pH необходимо проверить, используя третий буферный раствор, обычно именуемый контрольным буферным раствором, например имеющим pH 5 или pH 8.
Когда при проверке устанавливается, что результат находится за пределами максимально допустимой ошибки, выполняют контрольное исследование в соответствии с инструкцией изготовителя.
Измерение может сопровождаться калибровкой, которая позволит оценить неопределенность измерения данного рН-метра.
9
5.5.4 Обслуживание
Электроды проверяют и поддерживают в удовлетворительном состоянии в соответствии с инструкцией изготовителя. Ежедневно проверяют:
— состояние электродов с учетом их старения и загрязнения,
-характеристики, относящиеся к времени ответа при измерении и к стабильности измеряемых показателей.
Электроды необходимо ополаскивать дистиллированной или деионизированной водой после каждого использования. Учитывая загрязнение и старение электродов, их регулярно тщательно чистят в соответствии с инструкцией изготовителя.
Электроды хранятся в соответствии с инструкцией изготовителя.
5.6 Автоклав
5.6.1 Описание
Автоклав позволяет поддерживать в камере температуру насыщенного пара и используется для уничтожения (умерщвления) микроорганизмов.
Автоклав должен быть оснащен:
— как минимум одним предохранительным клапаном,
-сливным краном,
— регулятором температуры для поддержания необходимой температуры в камере в пределах ± 3 °С (с учетом неопределенности измерения, связанной с измерительной термопарой),
-температурным датчиком или регистрирующим термоэлементом.
Автоклав должен быть оснащен таймером и устройством для записи температуры.
5.6.2 Использование
При стерилизации водяным паром воздух перед автоклавированием удаляется с помощью увеличения давления. Если автоклав не снабжен автоматическим устройством удаления воздуха, его необходимо вытеснить, пока не начнет выходить непрерывная струя пара.
Для уничтожения (разрушения) микроорганизмов насыщенный пар в камере должен быть при температуре не менее 121 °С.
В течение одного и того же цикла стерилизации нельзя использовать автоклав для стерилизации чистого оборудования (и/или питательных сред) и одновременно обеззараживать использованное оборудование (и/или использованные питательные среды).
Предпочтительно использовать отдельные автоклавы для этих двух процессов. После автоклавирования все материалы и оборудование необходимо охладить в автоклаве перед их извлечением.
В целях безопасности нельзя извлекать содержимое из автоклава, пока температура не достигнет 80 °С.
5.6.3 Обслуживание
Регулярно моют камеру, сушат фильтр и уплотнители дверцы. Проверяют уплотнители дверцы на целостность. Через определенные интервалы и по мере необходимости выполняют операции по высушиванию и удалению накипи в соответствии с рекомендациями изготовителя.
5.6.4 Проверка и калибровка
Автоклав необходимо содержать в хорошем эксплуатационном режиме и регулярно проверять компетентным квалифицированным персоналом в соответствии с инструкциями изготовителя.
Контрольно-измерительные приборы необходимо поддерживать в порядке и готовности к работе и регулярно их проверять.
Начальная проверка должна включать в себя испытание рабочих показателей для каждого операционного цикла и каждой используемой в практической работе конфигурации загрузки. Этот процесс необходимо повторять после существенного ремонта или модификации прибора. При проверке устанавливают достаточное количество датчиков температуры, чтобы установить адекватное поступление тепла во все рабочие зоны прибора. При проверке и перепроверке необходимо установить как продолжительность времени нагревания, так и периода охлаждения, а также температуру стерилизации.
Там, где отсутствует прослеживаемая эффективность автоклавирования, необходимо при каждой загрузке в ее середину поместить индикатор автоклавирования для проверки процесса нагревания.
10
ГОСТ ISO 7218-2011
5.7 Аппарат для приготовления питательных сред
5.7.1 Описание
5.7.1 Описание
Аппарат для приготовления питательных сред разработан преимущественно для стерилизации больших объемов сред (> 1 дм3). Он состоит из нагревающегося сосуда, водяной рубашки и устройства непрерывного перемешивания. Оборудование должно быть оснащено термометром, манометром, таймером и предохранительным клапаном.
Кроме того, прибор должен иметь замок-предохранитель, чтобы предотвратить открывание, пока температура не достигнет менее 80 °С.
5.7.2 Использование
Необходимо всегда следовать инструкциям изготовителя.
Процесс приготовления питательных сред происходит только внутри аппарата. После добавления всех компонентов они растворяются посредством размешивания и нагревания. Затем происходит стерилизация.
5.7.3 Обслуживание
Аппарат моют и полностью ополаскивают чистой водой после каждой партии сред.
5.7.4 Проверка
Аппарат для приготовления питательных сред содержат в хорошем рабочем состоянии, регулярно проверяют компетентным квалифицированным персоналом в соответствии с инструкциями изготовителя.
Контрольно-измерительные приборы должны быть в хорошем рабочем состоянии и всегда подготовлены к работе.
Начальная проверка должна включать в себя изучение рабочих показателей для каждого операционного цикла и каждого объема загрузки, используемого в практике. Этот процесс необходимо повторить после значительного ремонта или модификации. Для демонстрации однородности нагревания следует установить два датчика температуры: один — примыкающий к контрольной пробе, а другой — отдаленный от нее.
Необходимо проверять температуру и продолжительность каждого цикла.
5.8 Термостат (инкубатор)
5.8.1 Описание
Термостат состоит из изолированной камеры, которая позволяет удерживать постоянство температуры, однородно распределенной в камере в пределах максимально допустимой температурной ошибки, указанной в методе испытания.
5.8.2 Использование
Термостаты должны быть оборудованы системой регулирования, которая позволяет сохранять температуру или другие параметры постоянными по полному рабочему объему камеры. Чтобы это условие выполнялось, определяют рабочий объем термостата.
Если окружающая температура близка или выше температуры в термостате, необходимо использовать систему охлаждения камеры.
Стенки термостата должны быть защищены от солнечного света.
Термостаты не следует заполнять полностью ни в одном операционном цикле, поскольку питательные среды будут отнимать значительно большее время для достижения постоянства необходимой температуры независимо от типа используемого инкубатора (с принудительно-воздушной вентиляцией или другого типа). Нельзя оставлять дверцы термостата открытыми в течение длительного периода времени.
При загрузке термостатов необходимо проследить за циркуляцией воздуха (см. 10.2.4).
5.8.3 Очистка и санитарная обработка
Регулярно очищают и проводят санитарную обработку внешних и внутренних стенок термостата и, если необходимо, удаляют пыль из системы вентиляции.
11
5.8.4 Проверка
Проверяют стабильность температуры и однородность распределения температуры в рабочем объеме камеры термостата с помощью одновременного использования нескольких термометров или термоэлементов известной точности в необходимом диапазоне температуры.
Полученную информацию используют для определения приемлемого операционного диапазона термостата и оптимального местоположения термометра для контроля рабочих температур.
Например, чтобы достигнуть необходимой температуры (37 ± 1) °С при данных контроля, который показывает диапазон 36,8 °С — 37,3 °С в разных частях рабочего объема термостата, рабочий диапазон необходимо уменьшить до 36,2 °С — 37,7 °С, чтобы обеспечить во всех частях термостата требуемую температуру 37 °С.
Этот процесс требуется повторять после каждого значительного ремонта или модификации термостата.
Температуру в процессе работы необходимо проверять с помощью одного или нескольких термометров с выявлением максимальной и минимальной границ диапазона или, например, с помощью записывающих термопар.
Термометр или записывающая термопара, используемые для постоянного контроля качества термостата, необходимо установить в положение, которое определено по данным температурного профиля для достижения необходимой температуры.
Температуру термостата проверяют каждый рабочий день. С этой целью каждый термостат должен включать не менее одного термометра, шарик которого погружен в глицерин (или другое подходящее вещество), находящийся в герметично упакованном сосуде.
Можно использовать другие системы проверки работы с равноценными характеристиками.
5.9 Холодильник, холодная комната (помещение для хранения на холоде)
5.9.1 Описание
Холодильники представляют собой камеры, которые позволяют поддерживать хранение при пониженной температуре. Для хранения проб пищевых продуктов температура должна быть (3 ± 2) °С (максимальные допустимые ошибки), за исключением специальных случаев использования.
Для других вариантов использования температура, если иначе не определено, должна быть (5 ± 3) °С.
5.9.2 Использование
Чтобы избежать перекрестного загрязнения, используют разные камеры, или, по крайней мере, различные контейнеры, достигая тем самым физического разделения, для хранения следующих продуктов:
— незасеянные питательные среды и реактивы,
— испытательные образцы для исследований,
— культуры микроорганизмов и инкубированные питательные среды.
Загрузку холодильников, холодных камер и холодных комнат проводят таким образом, чтобы поддерживалась необходимая циркуляция воздуха и возможность перекрестного заражения была сведена к минимуму.
5.9.3 Проверка
Температуру каждой камеры проверяют ежедневно, используя термометр или постоянно установленный датчик. Точность, требуемая для контролирующего температурного устройства, зависит от цели, с которой эта камера используется.
5.9.4 Обслуживание и очистка
Выполняют следующие профилактические операции с постоянными интервалами, чтобы обеспечить надлежащую работу оборудования:
— удаление пыли с лопастей мотора ил и с внешних пластин термообменника;
— размораживание;
— мытье и санитарную обработку внутренней части камеры.
ГОСТ ISO 7218-2011
5.10 Морозильная камера и низкотемпературная установка для глубокого замораживания
5.10.1 Описание
Морозильная камера — это аппарат, который гарантирует хранение в условиях замораживания. Температура, кроме особо оговоренных случаев, должна быть ниже минус 15 °С, предпочтительно ниже минус 18 °С для проб пищевых продуктов.
Установка для глубокого замораживания — это камера, которая гарантирует хранение глубокозамо-роженного продукта. Температура, если иначе не указано, должна быть ниже минус 70 °С.
5.10.2 Использование
5.10.2.1 Морозильная камера
Необходимо иметь разные камеры или разные контейнеры с достаточным пространством, чтобы обеспечить физическое разделение при хранении:
— неинокулированных реактивов,
— образцов для анализа и
— культур микроорганизмов.
Морозильные камеры заполняют таким способом, чтобы поддерживалась достаточно низкая температура, особенно в случаях, когда в них загружают незамороженные продукты.
5.10.2.2 Установка для глубокого замораживания
Морозильные камеры применяют для хранения микроорганизмов, контрольных и/или рабочих культур и реагентов. Загружают их таким способом, чтобы поддерживалась низкая температура и предотвращалось взаимное загрязнение между микроорганизмами и реагентами.
5.10.3 Проверка
Регулярно проверяют температуру каждой камеры, используя подходящие устройства, контролирующие температуру.
5.10.4 Техническое обслуживание
Регулярно выполняют следующие операции для поддержания морозильных камер в рабочем состоянии:
— удаление пыли с лопастей мотора и с внешних пластин термообменника (если возможно);
— регулярное размораживание;
— мытье и санитарную обработку внутренней части камеры.
5.11 Баня термостатическая контролируемая
5.11.1 Описание
Баня с терморегулятором, заполненная жидкостью (вода, этилен гликоль и т. д.), с подогнанной крышкой или без нее или другим устройством, ограничивающим испарение, которое требуется, чтобы поддерживать необходимую температуру. Контроль температуры часто более точен, чем в воздушном термостате, и обеспечивает максимально допустимое отклонение ± 0,5 °С и менее. Рабочие температуры и требуемые максимально допустимые погрешности устанавливают для каждого отдельного метода. Необходима система охлаждения для поддержания температуры, близкой к окружающей температуре или ниже данной температуры.
5.11.2 Использование
В основном баню используют для решения следующих задач:
— инкубации при постоянной температуре засеянных питательных сред;
— поддержания стерильных расплавленных агаровых сред при приготовлении сред;
— поддержания температуры стерильных расплавленных агаровых сред для использования в определенных методах;
— приготовления первичных образцов суспензий или растворов при контролируемой температуре;
-обработки нагреванием первичных образцов суспензии при контролируемой температуре (например, пастеризация).
Там, где требуется точный контроль температуры, баня должна быть оборудована циркуляционным водяным насосом и автоматической системой регулирования температуры. Любое перемешивание жидкости не должно приводить к разбрызгиванию капель.
13
Для использования при точной или высокой температуре предпочтительны бани с крышками. Следует использовать покатые крышки, создающие условия для стока конденсата.
Для инкубации засеянных питательных сред жидкость в бане поддерживают на уровне, чтобы верхний край питательной среды был на 2 см ниже уровня жидкости в бане в течение времени инкубации.
Другие контейнеры необходимо размещать в бане таким образом, чтобы уровень их содержимого был ниже уровня жидкости.
Глубина погружения должна препятствовать попаданию воды через крышку.
Допускается применять устройства для поддержания контейнеров в стабильном положении, например штативы.
После выемки из бани все контейнеры должны быть высушены перед дальнейшим использованием.
5.11.3 Проверка
Проверке подлежат стабильность и однородность температуры во всех частях бани перед началом использования и после любого ремонта или модификаций, оказывающих влияние на контроль температуры.
Контроль температуры в бане осуществляют с помощью термометра, термоэлементов или устройства регистрации температуры с подходящей минимальной неопределенностью измерения (см. 5.28.2) и независимо от автоматической системы регуляции температуры.
Допускается использовать цифровой дисплей при условии, что его точность и разрешение проверены на соответствие требованиям.
Температуру бани контролируют в течение каждого использования и, как минимум, ежедневно при продолжительной инкубации.
5.11.4 Обслуживание
Бани перед началом работы необходимо заполнить жидкостью, как рекомендуется изготовителем. Для инкубации культур следует использовать дистиллированную или деионизированную воду.
Регулярно проверяют уровень жидкости, чтобы обеспечить правильное функционирование бани и надлежащее погружение помещенных образцов в баню. Уровень жидкости должен всегда закрывать нагревательные элементы.
Жидкость из бань должна регулярно выливаться, баня очищаться, санироваться и снова заполняться жидкостью в зависимости от частоты использования, а также после того, когда происходит разбрызгивание или протекание бани.
5.12 Пароварки, включая бани с кипящей водой
5.12.1 Описание
Пароварки и бани с кипящей водой состоят из нагревательного элемента, окруженного водой в сосуде с плотно подогнанной крышкой. В пароварке при атмосферном давлении образуется пар; в бане с кипящей водой нагревается вода до температуры кипения или близкой к таковой с образованием или без образования пара.
5.12.2 Использование
Данные приборы используются, главным образом, для следующего:
— расплавления агаризованных питательных сред;
— приготовления неустойчивых к повышенной температуре сред;
— уменьшения зараженности мелких компонентов оборудования между использованием.
В сосуде должен быть достаточный уровень воды, чтобы обеспечить полное закрытие нагревательных элементов.
Можно использовать автоклав с автономной парообразущей способностью.
5.12.3 Обслуживание
Пароварки и бани с кипящей водой необходимо содержать в чистоте.
При необходимости следует чистить приборы от накипи с частотой, зависящей от жесткости местной
воды.
ГОСТ ISO 7218-2011
5.13 Стерилизационный сушильный шкаф
5.13.1 Описание
5.13.1 Описание
Стерилизационный сушильный шкаф — это камера, которая способна поддерживать температуру от 160 °С до 180 °С для уничтожения (разрушения) микроорганизмов с помощью сухого горячего воздуха.
5.13.2 Использование
В стерилизационном сушильном шкафу следует стерилизовать только прочное и твердое оборудование, такое как стеклянная посуда и металлические изделия.
Стерилизационный сушильный шкаф не допускается использовать для стерилизации изделий из каучука и пластмассы.
Перед стерилизацией стеклянной посуды и металлических инструментов их очищают и моют.
При стерилизации мерной стеклянной посуды ее регулярно проверяют на точность маркированных объемов.
Температура в стерилизационном сушильном шкафу должна быть одинаковой во всех частях камеры. Сушильный шкаф должен быть оснащен термостатом и термометром или устройством регистрации температуры.
Сушильный шкаф должен быть оборудован индикатором продолжительности работы, программируемым устройством или таймером.
Как только достигается температура стерилизации, процедура стерилизации должна длиться не менее одного часа при температуре 170 °С или поддерживать равноценный режим по параметрам время/температура.
После стерилизации, чтобы предотвратить растрескивание стеклянной посуды, перед ее изъятием из сушильного шкафа необходимо дать время для охлаждения, не вынимая из шкафа.
5.13.3 Проверка
Проверке подлежат стабильность и равномерность распределения температуры во всех зонах шкафа перед началом применения и после любого ремонта или модификации, которая может повлиять на контроль температуры.
Стерилизационный сушильный шкаф должен быть оснащен калиброванным термометром, термопарой или устройством регистрации температуры соответствующей точности, которое является независимым от автоматической системы регуляции температуры.
Контролирующее устройство должно иметь разрешение 1 °С или менее при температуре, используемой в сушильном шкафу.
Температуру сушильного шкафа следует проверять и регистрировать в течение каждого цикла использования.
5.13.4 Обслуживание
По мере необходимости моют внутренние поверхности сушильного шкафа.
5.14 Микроволновая печь
5.14.1 Описание
Микроволновая печь — это устройство, в котором нагревание продукта осуществляется с помощью микроволнового излучения при атмосферном давлении.
5.14.2 Использование
Имеющиеся в настоящее время микроволновые печи рекомендуется использовать только для нагревания жидкостей или плавления агаровых питательных сред.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Не допускается нагревание сред, содержащих чувствительные к высокой температуре компоненты, если не проверено, что этот способ нагревания не оказывает влияния на свойства среды. До настоящего времени нет оценки эффективности микроволн для стерилизации питательных сред, и поэтому микроволновые печи не допускается использовать для этой цели.
Микроволновая печь должна обеспечивать нагревание жидкостей и питательных сред с помощью цикла микроволнового излучения. Микроволновое поле должно быть гомогенным и равномерно распределенным по объему, чтобы избежать зон перегревания. Микроволновые печи, оснащенные поворотным столом или смесителем для микроволн, характеризуются лучшим распределением высокой температуры.
ГОСТ ISO 7218-2011
Содержание
1 Область применения………………………………… 1
2 Нормативные ссылки………………………………… 1
3 Помещения…………………………………….. 2
3.1 Общие положения………………………………… 2
3.2 Условия безопасности………………………………. 2
3.3 Планирование лаборатории……………………………. 3
3.4 Участки лаборатории……………………………….. 3
3.5 Расположение и оснащение помещений……………………… 3
3.6 Чистка и дезинфекция………………………………. 5
4 Требования к персоналу……………………………….. 5
4.1 Общие положения………………………………… 5
4.2 Квалификация………………………………….. 5
4.3 Проверка квалификации персонала лаборатории…………………… 5
4.4 Гигиена…………………………………….. 5
5 Аппаратура и оборудование …………………………….. 6
6 Подготовка стеклянной посуды и других лабораторных материалов……………. 24
6.1 Подготовка…………………………………… 24
6.2 Стерилизация/дезактивация……………………………. 25
6.3 Одноразовое оборудование и материалы……………………… 25
6.4 Хранение чистой стеклянной посуды и других материалов……………… 25
6.5 Применение обеззараживания (деконтаминации) и дезинфекции……………. 25
6.6 Обработка отходов………………………………… 26
6.7 Мойка……………………………………… 26
7 Приготовление и стерилизация питательных сред……………………. 26
8 Лабораторные пробы………………………………… 26
8.1 Отбор проб…………………………………… 26
8.2 Транспортирование……………………………….. 27
8.3 Получение проб…………………………………. 27
8.4 Хранение……………………………………. 28
8.5 Проба (навеска) для анализа…………………………… 28
9 Экспертиза (исследование)……………………………… 28
9.1 Гигиенические меры предосторожности при проведении исследований…………. 28
9.2 Приготовление исходной суспензии и разведений………………….. 29
10 Обработка результатов……………………………….. 30
10.1 Общие положения……………………………….. 30
10.2 Подсчет при использовании плотных питательных сред………………. 30
10.3 Обработка результатов, полученных на плотных средах………………. 33
10.4 Подсчет колоний дрожжей и плесеней……………………… 37
10.5 Подсчет при использовании жидких сред…………………….. 38
11 Метод выявления (качественный метод)……………………….. 42
11.1 Общие положения……………………………….. 42
11.2 Принцип…………………………………… 42
11.3 Измерение неопределенности………………………….. 43
12 Метод идентификации (подтверждения)……………………….. 43
12.1 Общие положения……………………………….. 43
12.2 Приготовление чистой культуры…………………………. 43
12.3 Окрашивание по Граму (модифицированный метод Хаккера)……………. 43
12.4 Использование биохимических наборов для идентификации…………….. 44
12.5 Применение нуклеиновых зондов для идентификации……………….. 45
12.6 Серологические методы……………………………. 45
13 Протокол испытания………………………………… 46
III
Нельзя использовать металлическое оборудование, включая металлические крышки. Крышки флаконов или пробки перед нагреванием в микроволновой печи необходимо приоткрыть.
Нагревание в течение более длинных периодов времени при меньшей номинальной мощности может обеспечить лучшее распределение высокой температуры.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ! Проводите нагревание изделий с осторожностью. Содержимое сосудов может перегреваться и выкипать, возможен взрыв флаконов.
Плавление агаровых питательных сред проводят при низкой мощности (например, режим размораживания), и нагревание воды (например, от 50 до 100 см3 воды в лабораторном стакане для микроволновой печи) рекомендуется для дополнительного контроля процесса нагревания.
После процесса нагревания следует подождать не менее 5 мин перед удалением содержимого из микроволновой печи.
5.14.3 Проверка
Необходимо определить подходящие время нагревания и мощность при первоначальном использовании микроволновой печи для различных объемов жидкостей и питательных сред, с которыми обычно работают в лаборатории. Таким образом обеспечивают оптимальный режим, при котором не происходит перегрев чувствительных продуктов.
5.14.4 Обслуживание
Печь немедленно очищают и моют при малейшем попадании брызг, а также через регулярные интервалы в зависимости от интенсивности использования.
Регулярно осматривают целостность уплотнителя двери печи, а печь регулярно проверяют на потерю излучения.
5.15 Машина для мытья стеклянной посуды
5.15.1 Описание
Лабораторные машины для мытья стеклянной посуды — это машины с электронным управлением, которые можно программировать на различные режимы мойки и полоскания (например, дистиллированной или деионизированной водой или кислотой).
Лабораторные машины для мытья стеклянной посуды могут иметь специальные устройства, разработанные специально для промывания узких отверстий пипеток.
5.15.2 Использование
Существует много типов машин для мытья стеклянной посуды, и обычно их устанавливают и эксплуатируют в соответствии с инструкцией изготовителя.
5.15.3 Проверка
Эффективность мытья оценивают посредством визуального осмотра, а в критических случаях проводят испытания, чтобы убедиться, что вымытая стеклянная посуда не содержит веществ, ингибирующих рост микроорганизмов.
Наличие щелочных и кислых остатков проверяют посредством использования индикаторного раствора. Необходимо, чтобы pH оставался в пределах диапазона 6,5—7,3.
5.15.4 Обслуживание
Регулярное обслуживание осуществляют в соответствии с рекомендациями изготовителя с установленным графиком.
Более частое обслуживание может потребоваться при интенсивном использовании машины для мытья стеклянной посуды в регионах с повышенной жесткостью воды.
5.16 Оптический микроскоп
5.16.1 Описание
Существует несколько различных типов микроскопа: монокулярный, бинокулярный, с дисплеем, с камерой или оборудованием для флюоресценции и т. д., и с внутренним или наружным источником света. Для бактериологических экспертиз используют объективы с увеличением от 10х (сухая линза) до примерно 100х (объектив с масляной иммерсией и подпружинной турелью) для получения общего уве-
ГОСТ ISO 7218-2011
14 Валидация (обоснованность) микробиологических методов……………….. 46
14.1 Валидация (обоснованность) стандартных методов………………… 46
14.2 Валидация (обоснованность) альтернативных методов………………. 46
14.3 Валидация (обоснованность) собственных методов………………… 46
15 Обеспечение качества результатов/контроля качества исполнения……………. 46
15.1 Внутренний контроль качества………………………….. 46
15.2 Референс-штаммы (справочные и эталонные штаммы)………………. 46
15.3 Внешний контроль качества (оценка качества сторонней организацией)……….. 47
Приложение А (справочное) Свойства некоторых дезинфицирующих веществ………… 48
Приложение В (справочное) Определение наиболее вероятного числа (НВЧ)………… 49
Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам……………………… 55
Библиография…………………………………….. 57
IV
ГОСТ ISO 7218-2011
Введение
При проведении микробиологических испытаний особенно важным является следующее:
— необходимо выделять и подсчитывать только те микроорганизмы, которые присутствуют в пробах;
— следует исключить загрязнение окружающей среды микроорганизмами.
Чтобы достичь этого, необходимо уделять особое внимание личной гигиене и использовать рабочие методики, гарантирующие, насколько это возможно, исключение загрязнения извне.
При проведении микробиологических экспертиз является важным знание микробиологических методов и исследуемых микроорганизмов. Также важно, чтобы исследования проводились с максимальной аккуратностью, включая вопросы контроля и регистрации, которые могут влиять на результаты и вычисление количества микроорганизмов, а также вызывать неуверенность в полученных результатах.
В конечном счете, ответственность лежит на руководителе лаборатории, который определяет, являются ли методические приемы безопасными и приемлемыми в рамках установившейся лабораторной практики.
Большое количество манипуляций может, например, непреднамеренно приводить к перекрестному загрязнению, и поэтому аналитику требуется всегда проверять точность результатов, полученных при использовании методик, используемых в лаборатории.
Чтобы проводить экспертизы правильно, необходимо предпринимать определенные правила безопасности, касающиеся оснащения и оборудования лаборатории.
Необходимо предпринимать меры предосторожности не только по причине гигиены, но также и для того, чтобы гарантировать хорошую воспроизводимость результатов. Невозможно предусмотреть все меры для всех возможных ситуаций, но настоящий стандарт, по меньшей мере, предусматривает основные правила приготовления, стерилизации, хранения питательных сред и использования соответствующего оборудования.
Следование правилам, изложенным в настоящем стандарте, поможет обеспечить безопасность персонала. Дополнительную информацию по этому вопросу можно найти в литературе, указанной в разделе «Библиография».
V
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ
ДЛЯ животных
Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
Microbiology of foods and animal feed.
General requirements and guide for microbiological research
Дата введения — 2013—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает общие требования и дает рекомендации/варианты по трем основным направлениям:
— внедрение стандартов Технического комитета ISO/ТС 34/SC9 или 34/SC 5 по обнаружению и подсчету микроорганизмов, здесь и далее называемых соответствующими «стандартами на конкретный метод испытания»;
— надлежащая лабораторная практика для микробиологических лабораторий, исследующих пищевые продукты (в задачи настоящего стандарта не входит их описание, для этого имеются специальные справочники);
— руководство по аккредитации микробиологических лабораторий (в настоящем стандарте описываются технические требования согласно приложению В стандарта ISO/IEC 17025 для аккредитации микробиологических лабораторий национальными органами).
Требования настоящего стандарта отменяют и заменяют собой соответствующие требования существующих стандартов на конкретный метод испытания.
Дополнительные требования по исследованиям в области молекулярной биологии приведены в ISO 22174.
Настоящий стандарт распространяется на исследования бактерий, дрожжей и плесеней. Допускается применение настоящего стандарта при исследованиях паразитов и вирусов при условии дополнения конкретными рекомендациями.
Настоящий стандарт не распространяется на исследования токсинов и других продуктов метаболизма (например аминов) микроорганизмов.
Настоящий стандарт применяется в микробиологии пищевых продуктов, кормов для животных, окружающей среды производства пищевых продуктов и производства сырья для пищевых продуктов.
2 Нормативные ссылки
Для применения настоящего стандарта необходимы следующие ссылочные документы. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).
ISO 835:2007* Laboratory glassware — Graduated pipettes (Посуда лабораторная стеклянная. Мерные градуированные пипетки)
* Действует взамен ISO 835-1:1981, ISO 835-2:1981, ISO 835-3:1981 и ISO 835^:1981.
Издание официальное
ISO 6887 (все части)* Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований)
ISO 8199:2005 Water quality — General guidance on the enumeration of microorganisms by culture (Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом посева на питательной среде)
ISO 8655-1:2002 Piston-operated volumetric apparatus — Part 1: Terminology, general requirements and user recommendations (Устройства мерные, приводимые в действие поршнем. Часть 1. Терминология, общие требования и рекомендации пользователю)
ISO/TS 11133 (все части) Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and production of culture media (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Правила приготовления и производства питательных сред)
ISO 16140:2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Protocol for the validation of alternative methods (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)
ISO/TS 19036:2006 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines for the estimation of measurement uncertainty for quantitative determinations (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководство по оценке неопределенности измерений для количественных определений)
ISO 22174:2005 Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR)forthe detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) для обнаружения патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах. Общие требования и определения)
3 Помещения
3.1 Общие положения
В данном разделе представлены общие требования и принципы планирования и организации при размещении микробиологической лаборатории.
Экспертизу образцов на стадии производства пищевого сырья (особенно для приемки образцов и стандартной подготовки проб) следует проводить отдельно от исследования других образцов, чтобы уменьшить риск перекрестного загрязнения.
3.2 Условия безопасности
Лабораторный проект должен содержать требования безопасности, которые будут зависеть от типа эпидемиологической опасности микроорганизма. Поэтому принципу микроорганизмы классифицируются на четыре категории риска:
— 4-я категория риска (группа патогенности) (отсутствие риска или очень низкий риск для отдельного человека и общества).
Вероятность заражения таким микроорганизмом человека или животного мала.
— 3-я категория риска (группа патогенности) (умеренный риск для отдельного человека, низкий риск для общества).
Патоген, который может вызвать заболевание у человека или животного, но не представляющий серьезной угрозы для сотрудников лаборатории, общества или окружающей среды. Контакт с таким микроорганизмом в лаборатории может вызвать серьезную инфекцию у человека, но имеются способы эффективного лечения и профилактические меры, а риск распространения инфекции ограничен.
-2-я категория риска (группа патогенности) (высокий риск для индивидуума, низкий риск для общества).
Патоген, который обычно вызывает тяжелую болезнь у человека или животного, но обычно не распространяется от одного инфицированного индивидуума к другому. Существуют способы эффективного лечения и меры профилактики.
1-я категория риска (группа патогенности) (высокий риск для индивидуума и для общества).
ISO 6887-5:2010 действует взамен ISO 8261:2001.
ГОСТ ISO 7218-2011
Патоген, который обычно вызывает тяжелую болезнь у человека или животного и легко передается от больного к здоровому человеку или животному прямым контактом или с помощью другого механизма передачи возбудителя. Эффективных способов лечения и профилактических мер обычно не существует.
Представителей 3-й и 4-й групп патогенности микроорганизмов часто обозначают как непатогенные или условно патогенные виды микроорганизмов, а патогены 1-й и 2-й групп патогенности относятся к возбудителям особо опасных инфекционных заболеваний.
3.3 Планирование лаборатории
Рекомендации и правила по принципам размещения лабораторий, описываемые ниже, применимы к исследованиям по выявлению микроорганизмов, относящихся к группам патогенности 2,3 и 4 для микробиологии пищевых продуктов.
3.4 Участки лаборатории
3.4.1 Общие положения
Лаборатория включает отдельные участки, предназначенные для работы с пробами и их анализом (см. 3.4.2), и общие помещения (см. 3.4.3). Они должны быть раздельными.
3.4.2 Участки, связанные с работой с пробами и их исследованием
Необходимо, чтобы лаборатория имела отдельные помещения или четко обозначенные зоны для следующих операций:
— приемки, регистрации и хранении проб;
— подготовки проб, особенно в случае сырья (например, порошковые изделия, содержащие высокое количество микроорганизмов);
— экспертизы проб (начиная от исходной суспензии), включая инкубацию (термостатирование) микроорганизмов;
— манипуляции с предполагаемыми патогенами;
-хранения контрольных и других штаммов;
— приготовления и стерилизации питательных сред и оборудования;
— хранения питательных сред и реактивов;
-экспертизы пищевых продуктов на стерильность;
-дезактивации (обеззараживание);
— приготовления стеклянной посуды и другого оборудования;
— хранения опасных химических веществ, предпочтительно в предназначенных для этого боксах, шкафах, отдельных комнатах или строениях.
3.4.3 Общие участки
Отдельно должны быть предусмотрены следующие участки:
— входы, коридоры, лестницы, лифты;
-административные помещения (например, комната для секретаря и офисные комнаты, комнаты для работы с документами и т. д.);
— раздевалки и туалеты;
— помещение для хранения архива;
— кладовые;
— комнаты отдыха.
3.5 Расположение и оснащение помещений
3.5.1 Цели
Цель состоит в том, чтобы условия окружающей среды, в которой проводят микробиологические исследования, не влияли на достоверность получаемых результатов исследований.
Помещения располагают таким образом, чтобы избежать риска перекрестного заражения. С этой целью необходимо соблюдать следующие положения:
a) организация помещений лаборатории согласно принципу «никакого пути назад», то есть без пересечения потоков;
b) выполнять процедуры последовательно, придерживаясь правил необходимой безопасности, чтобы гарантировать чистоту и целостность пробы (например, путем использования герметичных и опломбированных контейнеров);
3
с) разделять деятельность при выполнении различных этапов работы во времени и пространстве.
Необходимо избегать экстремальных ситуаций, таких как повышенная температура, запыленность, повышенная влажность, пар, шум, вибрация и т. д.
Помещения и площадь для лаборатории должны быть достаточными для поддержания чистоты и порядка в них. Помещения и площадь лаборатории должны быть соизмеримы с объемом проводимых исследований и общей внутренней организацией лаборатории. Они должны соответствовать требованиям национальных инструкций или регламентов, если таковые существуют.
3.5.2 Оборудование помещений
Чтобы уменьшить риск загрязнения пылью и, следовательно, микроорганизмами (для 2-й группы патогенности необходимо соблюдать национальные нормативные документы), помещения для проведения исследований должны быть построены и оборудованы следующим образом:
a) Стены, потолки и этажи должны быть гладкими, стойкими к моющим и дезинфицирующим средствам, используемым в лаборатории, легко мыться.
b) Полы не должны быть скользкими.
c) Верхние трубы, по которым проходит жидкость, не должны пересекать помещение, если они герметично не изолированы. Все другие навесные конструкции должны быть закрыты, но легко доступны при необходимости их периодической очистки.
d) При проведении исследований окна и двери должны быть закрытыми. Конструкция окон и дверей должна исключать возможность скопления пыли и облегчать их чистку. Окружающая температура (от 18 °С до 27 °С) и качество воздуха (содержание микроорганизмов, скорость распространения пыли и т. д.) должны быть сопоставимы с проведением исследований. Для этой цели рекомендуется вентиляционную систему оборудовать фильтрами для поступающего в помещение воздуха и на выходе воздуха из него.
e) Необходимо установить адекватную систему вытяжной вентиляции, чтобы предотвратить распыление при работе, возникающее при приготовлении дегидратированных питательных сред, пылеобразных и порошковых образцов.
f) Если испытания необходимо проводить в атмосфере низкого уровня контаминации (загрязнения), комната должна быть специально оборудована чистым ламинарным кабинетом с потоком воздуха и/или безопасным боксом.
д) Если необходимо, помещения лаборатории должны быть защищены от вредных воздействий солнечной радиации с помощью ставней или специально обработанных стеклянных панелей. Не допускается устанавливать шторы или жалюзи изнутри, поскольку их трудно чистить и они могут быть источником пыли.
3.5.3 Прочие условия
Необходимо также предусмотреть выполнение следующих условий:
— подводка воды надлежащего качества для использования;
-наличие электрического питания;
— подводка газа (по трубам — централизованного или в баллонах);
— достаточное освещение в каждой зоне лаборатории;
— поверхности лабораторного инвентаря и мебели должны быть изготовлены из гладкого непроницаемого материала, который легко мыть и дезинфицировать;
— лабораторная мебель должна быть разработана таким образом, чтобы облегчить ее обработку (например, передвижная мебель);
— в помещениях, где проводят исследования образцов, не должны находиться мебель, документация и другие вещи, которые не применяются для проведения анализа;
— документация, используемая в работе с образцами, должна храниться в закрытых шкафах или ящиках столов;
— в каждой комнате, где проводят исследования, необходимо установить раковины для мытья рук и, если необходимо, в других участках, предпочтительно около двери;
— наличие автоклава для обеззараживания зараженных отработанных материалов и использованных питательных сред, если нет специальной системы для удаления зараженных отходов для сжигания на
месте;
— обеспечение защитных систем для борьбы с огнем (огнетушители, ведра и т. д.) системой аварийного электропитания, аварийного обеспечения водой для душа и промывания глаз;
— обеспечение средствами для оказания первой помощи.
4
ГОСТ ISO 7218-2011
3.6 Чистка и дезинфекция
Объектами уборки и дезинфекции являются:
a) Полы, стены, потолки, поверхности лабораторных столов, мебель следует содержать в чистоте и ремонтировать, чтобы избежать образования трещин, которые могут быть источником загрязнения.
b) Чтобы содержать помещение в состоянии, пригодном для проведения исследований, уборку и дезинфекцию следует выполнять постоянно. Загрязненные или потенциально зараженные поверхности следует дезактивировать, для чего необходимо использовать дезинфицирующие средства, обладающие способностью уничтожать бактерии и грибы.
Примечание — Комнаты и оборудование могут быть дезактивированы окуриванием парами формальдегида, если это допускается национальными инструкциями.
c) Системы вентиляции и их фильтры следует регулярно проверять, при необходимости, с заменой фильтров на новые.
d) Микробиологическое качество рабочих поверхностей лаборатории, поверхностей, с которыми соприкасается персонал, а также воздух необходимо регулярно проверять (частота проверок зависит от результатов предыдущих исследований).
e) Загрязнение поверхности следует очистить наложением на них пластин, содержащих соединения, способные нейтрализовать дезинфицирующие вещества (например, лецитин, тиосульфат натрия). Качество воздуха может быть исследовано при экспозиции открытой чашки Петри в течение 15 мин, содержащей неселективную агаровую питательную среду (например, среду для подсчета колоний — мясопептон-ный агар — МПФ-РСА (plate count agar)) или селективную агаровую среду, используемую для выявления искомых микроорганизмов (например, плесеней).
Примечание — Могут также использоваться другие методы для оценки загрязнения поверхностей и воздуха. См. ISO 18593.
4 Требования к персоналу
4.1 Общие положения
Общие требования к квалификации персонала изложены в ISO/IEC17025.
4.2 Квалификация
Как при приеме на работу сотрудников, так и для уже работающих в лаборатории необходимо установить объективные критерии оценки соответствующей квалификации по владению необходимыми методами или техническими приемами.
Квалификация может быть установлена в пределах лаборатории с помощью внутреннего контроля качества (см. 15.1.2).
Примечание — Одна из причин плохого выполнения работы (пипетирование, плохая гомогенность первичной суспензии, подсчет и т. д.) в случае учета числа колоний описана в ISO 14461-1.
4.3 Проверка квалификации персонала лаборатории
Проверку квалификации работающего персонала в лаборатории необходимо проводить регулярно, основываясь на объективных параметрах. Она включает участие в программах по внутреннему контролю качества, проверку квалификации (см. ISO 43-1), использование стандартных образцов или проверку по тестам самооценки при подсчете микроорганизмов, как описано в ISO 14461-2.
4.4 Гигиена
В лаборатории следует соблюдать следующие меры личной гигиены, чтобы избежать загрязнения образцов и питательных сред, а также избежать риска инфицирования персонала:
a) Лабораторная одежда должна быть застегнутой надлежащим способом, чистой, в хорошем состоянии, изготовленной из ткани, ограничивающей риск воспламенения. Эту одежду не следует носить вне рабочей зоны и, в частности, в ней нельзя выходить в туалет.
b) На волосы головы и бороду следует надеть защитные повязки.
c) Ногти следует содержать в чистоте и желательно короткими.
d) Необходимо мыть руки в теплой воде из нерегулируемого вручную крана до и после микробиологических исследований, а также после посещения туалета. Рекомендуется использовать жидкое или
5