ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ
НАЦИОНАЛЬНЫЙ
СТАНДАРТ
РОССИЙСКОЙ
ФЕДЕРАЦИИ
ГОСТР
53193-
2008
НАПИТКИ АЛКОГОЛЬНЫЕ И БЕЗАЛКОГОЛЬНЫЕ
Определение кофеина, аскорбиновой кислоты и ее солей, консервантов и подсластителей методом капиллярного электрофореза
Издание официальное
3
I
8
I
<■>
ю
Москва
Ста кдарти нформ 2010
ГОСТ Р 53193—2008
Предисловие
Цели и принципы стандартизации е Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0—2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Группой компаний «Люмэкс» (Санкт-Петербург)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность»
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 1 б декабря 2008 г. Ne 648-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
© Стандартинформ. 2010
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
ГОСТ Р 53193—2008
Содержание
1 Область применения………………………………………….1
2 Нормативные ссылки…………………………………………..1
3 Термины и определения…………………………………………2
4 Сущность метода……………………………………………..2
5 Средства измерений, стандартные образцы, вспомогательное оборудование, реактивы,
материалы…………………………………………………2
6 Отбор проб…………………………………………………3
7 Подготовка к проведению испытаний………………………………….3
8 Проведение испытаний………………………………………….7
9 Обработка результатов испытаний……………………………………8
10 Метрологические характеристики……………………………………9
11 Контроль качества результатов измерений………………………………9
Приложение А (справочное) Примеры электрофореграмм……………………….10
Библиография………………………………………………..11
in
ГОСТ Р 53193—2008
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
НАПИТКИ АЛКОГОЛЬНЫЕ И БЕЗАЛКОГОЛЬНЫЕ
Определение кофеина, аскорбиновой кислоты и ее солей, консервантов и подсластителей методом капиллярного электрофореза
Alcoholic end non-alcoholic drinks and beverages. Determination of caffeine, ascorbic acid and its setts, preservatives
and sweeteners using capillary electrophoresis method
Дата введения — 2010—01—01
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод капиллярного электрофореза для определения массовой концентрации кофеина, аскорбиновой кислоты и ее солей, консервантов (сорбиновой и бензойной кислот и их солей), подсластителей (ацесульфама К. сахарина и его солей) в слабоалкогольных и безалкогольных напитках, винах и еиноматериалах. соках и сокосодержащих напитках.
Диапазон измеряемых значений массовой концентрации указанных соединений составляет 10—1000 мг/дм3.
Определению не мешают другие подсластители (аспартам, цикламат), синтетические пищевые красители, витамины группы В и ванилин в концентрациях, характерных для анализируемых напитков.
8 условиях проведения анализа невозможно разделение индивидуальных форм нормирования сорбиновой. бензойной, аскорбиновой кислот и сахарина.
2 Нормативные ссылки
8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025—2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
ГОСТ Р 51144—98 Продукты винодельческой промышленности. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ Р 52501—2005 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия ГОСТ 1770—74 (ИС0 1042—83, ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры. мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 4199—76 Реактивы. Натрий тетраборнокислый 10-водный. Технические условия ГОСТ 4328—77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 6687.0—86 Продукция безалкогольной промышленности. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 10652—73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N. N. N–. N’-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия
ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Тилы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26313—84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб
Издание официальное
1
ГОСТ Р 53193—2008
ГОСТ 29169—91 (ИС0648—77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой
ГОСТ 29227—91 (ИСО 835*1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание – При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии а сети Интернат или по ежегодно издаваемому указателю «Национальные стандарты*. который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, а котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 форма нормирования: Конкретная химическая форма аскорбиновой, сорбиноаой. бензойной кислот и сахарина, содержание которой нормируется в напитке.
3.2 форма определения: Химическая форма аскорбиновой, сорбиновой. бензойной кислот и сахарина, в единицах массовой концентрации которой выражается результат измерений при обработке электрофореграмм с использованием градуировочной зависимости.
3.3 форма взвешивания: Химическая форма аскорбиновой, сорбиновой. бензойной кислот и сахарина, используемая для приготовления исходного раствора путем взятия навески.
4 Сущность метода
Метод измерений основан на разделении и количественном определении массовой концентрации анализируемых компонентов методом капиллярного электрофореза в варианте мицеллярной электро-кинетической хроматографии. Детектирование проводят по собственному поглощению компонентов при длине волны 254 нм.
5 Средства измерений, стандартные образцы, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы
Система капиллярного электрофореза (например [1]) (далее — прибор) с положительной полярностью источника высокого напряжения от 1 до 25 кВ. оснащенная кварцевым капилляром (внутренний диаметр 75 мкм. эффективная длина не менее 50 см), фотометрическим или спектрофотометрическим детектором, позволяющим регистрировать оптическое поглощение в диапазоне длин волн от 220 до 280 нм. и компьютером с программным обеспечением для регистрации и обработки электрофореграмм.
Весы лабораторные общего назначения высокого или специального класса точности по ГОСТ 24104 снаибольшим пределом взвешивания 200ипи210 гиценой наименьшего деления не более0.1 мг.
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1.2.5 см3 по ГОСТ 29227.
Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 25.100.1000 см3 по ГОСТ 1770.
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 50 см3 по ГОСТ 1770.
Пипетка с одной отметкой 2-го класса точности вместимостью 5.10 и 50 см3 по ГОСТ 29169.
Дозаторы липеточные одноканальные переменного объема от 10 до 100 и от 100 до 1000 мм3.
pH-метр любого типа с диапазоном измерений pH от 1 до 14 с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0.05.
Центрифуга лабораторная с частотой вращения не менее 5000 мини.
Пробирки одноразовые типа Эппендорф вместимостью 1.5 см3 [2].
Колбы плоскодонные вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.
Насос водоструйный по ГОСТ 25336.
Баня водяная.
Фильтры целлюлозно-ацетатные, размер лор 0.2 мкм. диаметр 25 мм [3].
Оправа для целлюлозно-ацетатного фильтра.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа по ГОСТ Р 52501 первой степени чистоты.
2
ГОСТ Р 53193—2008
Натрий тетраборнокислый. стандарт-титр, молярная концентрация 0.05 моль/дм3 (молярная концентрация эквивалента 0.1 моль/дмэ) или натрий тетраборнокислый десятиеодный. х.ч. по ГОСТ 4199.
Додецилсульфат натрия. ч.д.а. или х.ч. (4].
Гидроксид натрия, х.ч. по ГОСТ 4328.
Этилендиамин — N.N.N’.N’-тетрауксусной кислоты динатриевая соль. 2-еодная (трилон Б), чд.а. поГОСТ 10652.
Сорбат калия, массовая доля основного вещества не менее 99 %.
Аскорбиновая кислота, фармакопейная.
Бензоат натрия, ч. [5].
Кофеин фармакопейный или импортный, массовая доля основного вещества не менее 99 %.
Ацесульфам К. массовая доля основного вещества не менее 99 %.
Сахаринат натрия кристаллогидрат, массовая доля основного вещества не менее 99 %.
Допускается использование других средств измерений, материалов и реактивов, имеющих аналогичные или лучшие метрологические и технические характеристики.
6 Отбор проб
Отбор проб вин и виноматериалов — по ГОСТ Р 51144. алкогольных и безалкогольных напитков— по ГОСТ 6687.0. соков и сокосодержащих напитков — по ГОСТ 26313.
7 Подготовка к проведению испытаний
7.1 Подготовка стеклянной посуды
Для мытья стеклянной посуды используют только концентрированную серную кислоту или концентрированную азотную кислоту. После мытья кислотой посуду многократно ополаскивают дистиллированной водой.
7.2 Приготовление вспомогательных растворов
7.2.1 Приготовление раствора гидроксида натрия массовой концентрации 20 г/дм3
8 мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают от 50 до 60 см3 дистиллированной воды. 2г гидроксида натрия, тщательно перемешивают. По окончании растворения доводят дистиллированной водой до метки. Срок хранения в сосуде из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой — не более 2 мес.
7.2.2 Приготовление раствора натрия тетраборнокислого молярной концентрации
0,05 моль/дм3 (молярная концентрация эквивалента 0,1 моль/дм3)
Раствор готовят из стандарт-титра по прилагаемой кнему инструкции. Растеорсохраняютеплотно закрытом полиэтиленовом сосуде в условиях, исключающих поглощение углекислого газа. Срок хранения — не более 2 мес.
При отсутствии стандарт-титра раствор готовят в мерной колбе вместимостью 1000см3 путем растворения 19.07 г натрия тетраборнокислого десятиводного в свежелрокипяченной дистиллированной воде и разбавления до метки этой же водой.
7.2.3 Приготовление раствора додецилсульфата натрия молярной концентрации 0,2 моль/дм3
В мерную колбу вместимостью 25см3 помещают 1,44 гдодецилсульфатанатрия. добавляют 10 см3
дистиллированной воды, тщательно перемешивают, выдерживают на водяной бане при температуреот 40 ®С до 45 *С до полного растворения и после охлаждения доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора — не более 3 мес.
7.2.4 Приготовление рабочего буферного раствора (ведущий электролит)
8 мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают при помощи пипеток 5 см3 раствора натрия тетраборнокислого по 7.2.2.5 см3 раствора додецилсульфата натрия по 7.2.3и доводят до метки дистиллированной водой. Тщательно перемешивают и фильтруют через целлюлозно-ацетатный фильтр в другой сосуд с завинчивающейся крышкой, отбрасывая первую порцию фильтрата от 1 до 1.5 см3.
8 ведущем электролите молярная концентрация натрия тетраборнокислого составляет 10 ммоль/дм3. молярная концентрация додецилсульфата натрия 40 ммоль/дм3.
Срок хранения раствора в сосуде из полиэтилена — не более 1 мес.
з
ГОСТ Р 53193—2008
Перед использованием рабочий буферный раствор дегазируют центрифугированием отЗ до 5 мин при частоте вращения 5000 мин-1.
Примечание — При необходимости объем приготавливаемого буферного раствора можно уменьшить или увеличить.
7.2.5 Приготовление раствора трилона S молярной концентрации 0,05 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1.86 г трилона Б. добавляют от 50 до 60 см3 дистиллированной воды, выдерживают на водяной баке при температуре не более 50 *С до полного растворе* ния, охлаждают, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Срок хранения раствора в сосуде из полимерного материала — не более одного года.
7.3 Приготовление растворов для проведения градуировки прибора
7.3.1 Приготовление исходных растворов определяемых компонентов номинального значения массовой концентрации 1000 мг/дм3
В мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают навеску соответствующей формы взвешивания соединения (см. таблицу 1). допускаемое отклонение массы навески от указанного в таблице 1 составляет ±5 мг. Навеску растворяют в дистиллированной воде. При приготовлении раствора аскорбиновой кис* лоты добавляют 2.5см3 раствора трилона Б(см. 7.2.5). Разбавляют до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
Действительное значение массовой концентрации исходного раствора С,, мг/дм3. вычисляют по формуле
0Д25 ■’
(1)
где т, — масса навески, мг;
0,025 — объем приготовленного раствора, дм3; fj — фактор пересчета (см. таблицу 1); i— номер компонента.
Срок хранения исходных растворов в холодильнике при температуре (4 ±2)вС приведен в таблице 1.
Таблице 1
|
Форма взвешивания |
Форма определения |
Масса навески. мг |
Фактор пересчета |
Срок хранения, не более |
|
Ацесульфам К |
Ацесульфам К |
25 |
1 |
3 мвС |
|
Сахаринатнатрия |
Сахаринат натрия |
25 |
1 |
3 мес |
|
Бензоат натрия |
Бензойная кислота |
30 |
0.85 |
3 мес |
|
Кофеин |
Кофеин |
25 |
1 |
3 мес |
|
Сорбат калия |
Сорбиноаая кислота |
34 |
0.75 |
2 нед |
|
Аскорбиновая |
Аскорбиновая |
|||
|
кислота |
кислота |
25 |
1 |
2 нед |
7.3.2 Приготовление градуировочных смесей
Используя исходные растворы индивидуальных компонентов (см. 7.3.1). готовят не менее трехгра* дуировочных смесей, содержащих все определяемые компоненты в диапазонах линейности градуиро* вочных зависимостей (для аскорбиновой и сорбиковой кислот от 4 до 100 мг/дм3. для остальных компонентов — от 8 до 200 мг/дм3).
Массовую концентрацию /-го компонента вычисляют по формуле
Г = с* (2)
* v,
где Сй — массовая концентрация /*го компонента в исходной смеси, использованном для приготовле* ния данной смеси, мг/дм3;
— объем исходной смеси, использованный для приготовления данной смеси, см3;
ГОСТ Р 53193—2008
Vf — объем приготовленной смеси, см3.
Срокхранения градуировочных смесейе холодильнике лритемпературе (4 ±2)*С—не более 2сут. Рекомендуемый состав градуировочных смесей приведен в таблице 2.
Таблица 2 — Массовая концентрация компонентов в градуировочных смесях
|
Компонент |
Массовая концентрация, мг/дм1 |
||
|
Смесь № 1 |
Смесь Nt 2 |
Смесь № 3 |
|
|
Аскорбиновая кислота, сорбиноевя кислота |
100 |
40 |
4 |
|
Бензойная кислота, кофеин, ацесульфам К. сахаринвт натрия |
200 |
80 |
8 |
7.3.3 Приготовление контрольной смеси
Контрольную смесь используют для проверки работоспособности системы и для контроля ста* бильности градуировочной характеристики.
8 мерную колбу вместимостью 25 см3 помещают по 0.5 см3 исходного раствора каждого определя* емого компонента (см. 7.3.1}. доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Номинальные значения массовой концентрации компонентов составляют 20 мг/дм3. Действительные значения массовой концентрации компонентов рассчитывают по формуле (2).
Срок хранения контрольной смеси в холодильнике при температуре (4 ± 2) вС — не более 3 сут.
В качестве контрольной смеси допускается использовать градуировочную смесь № 2.
Примечание — Допускается использование иной по качественному и количественному составу контрольной смеси, содержащей определяемые компоненты в концентрациях, соответствующих диапазону построения градуировочной характеристики.
7.4 Подготовка прибора
Подготовку прибора к измерениям проводят в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации. Задают рабочую длину волны спектрофотометрического детектора 254 нм. рабочее напряжение 25 кВ. рабочую температуру 20 ’С (при наличии опции), а также параметры ввода проб (время, давление), руководствуясь рекомендациями изготовителя прибора. В карусель автосемллера (при его наличии) помещают растворы, необходимые для промывки капилляра, ведущий электролит, градуировочные смеси и/ипи подготовленные пробы.
7.5 Подготовка капилляра
7.5.1 Подготовка нового капилляра
Новый капилляр промывают последовательно по 10 мин дистиллированной водой, раствором гидроксида натрия (см. 7.2.1). дистиллированной водой и ведущим электролитом (см. 7.2.4).
7.5.2 Ежедневная подготовка капилляра
В начале рабочего дня капилляр промывают по 5 мин раствором гидроксида натрия (см. 7.2.1) и дистиллированной водой и 10 мин ведущим электролитом (см. 7.2.4). Все промывочные растворы собирают в сливную пробирку, не погружая в нее выходной конец капилляра.
Затем капилляр промывают ведущим электролитом при напряжении 25 к8 в течение 5 мин и проводят контроль стабильности градуировочной характеристики по 7.7.
Между анализами образцов капилляр промывают рабочим буферным раствором в течение 3 мин.
После завершения работ по анализу проб капилляр промывают 10 мин дистиллированной водой и оставляют концы капилляра погруженными в пробирки с дистиллированной водой.
Примечание — При работе с пробами на злектрофореграмме может наблюдаться дрейф базовой линии, появление ступеней и смещение времен миграции компонентов, что связано с возможным мешающим влиянием матричных компонентов или примесей. 8 этом случае рекомендуется:
• увеличивать время промывки ведущим электролитом между анализами;
• проводить короткую промывку под напряжением ведущим электролитом;
• при появлении ступеней заменять свежими порциями рабочий буферный раствор в пробирках на входе и на выходе капилляра;
• промывать капилляр по 3 мин раствором гидроксида натрия, дистиллированной водой и ведущим электролитом.
5
ГОСТ Р 53193—2008
7.5.3 Хранение капилляра
При перерывах в работе не более одной недели капилляр промывают 10 мин дистиллированной водой и оставляют концы капилляра погруженными в пробирки с дистиллированной водой.
При перерывах в работе на более длительный срок капилляр высушивают и оставляют в сухом состоянии. После сухого хранения для восстановления работоспособности калиллярготовят кработепо 7.5.1.
7.6 Градуировка прибора
Для проведения градуировки прибора анализируют не менее двух раз градуировочные смеси, приготовленные по 7.3.2. Капилляр после каждого анализа промывают по 7.5.2. Непосредственно перед анализом градуировочные растворы цвнтрифугируютетеченивб мин лричастоте вращения 5000 мин
Регистрируют не менее двух электрофореграмм каждой градуировочной смеси, проверяют правильность автоматической разметки пиков и при необходимости корректируют ее и проводят градуировку прибора, устанавливая параметры градуировочной характеристики и время миграции каждого компонента.
Задают ширину окна идентификации не более 5 %. Рассчитывают отклонения рассчитанных значений массовой концентрации компонентов в каждой градуировочной точке от действительных значений и коэффициент корреляции.
Градуировочная характеристика должна соответствовать следующим требованиям:
• относительное отклонение рассчитанного значения от действительного значения массовой концентрации компонента в градуировочной смеси не более ± 6 % для кофеина и сахарината натрия и не более ± 10 % для остальных компонентов. Вместоотносительного отклонения качество градуировочной характеристики может быть оценено по относительному стандартному отклонению, значение которого должно быть не более 3 % для кофеина и сахарината натрия и не более 5 % для остальных компонентов (б):
• коэффициент корреляции не менее 0.99.
Г радуировку прибора проводят заново при замене капилляра, после проведения ремонта ил и длительного простоя прибора, при смене партии хотя бы одного из компонентов ведущего электролита, при изменении одного из условий проведения анализа (температуры, рабочего напряжения, времени и/или давления при вводе пробы), а также при неудовлетворительных результатах контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 7.7).
7.7 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале рабочего дня после промывки капилляра согласно 7.5.2. используя контрольную смесь по 7.3.3.
Регистрируют не менее двух электрофореграмм контрольной смеси в условиях, соответствующих анализу градуировочных растворов, проводят автоматическую идентификацию компонентов, установив ширину окна идентификации 5 %, и при необходимости вносят программную коррекцию времени миграции. При помощи градуировочной зависимости (см. 7.6) рассчитывают массовую концентрацию компонентов для каждого ввода.
Проверяют сходимость значений массовой концентрации компонентов по формуле
|Сп-Сй| £0.07 С* (3)
где С, — среднеарифметическое значений массовой концентрации ко компонента в контрольной смеси, полученных по первой и второй электрофореграммам. мг/дм3;
С,1и С,2 — массовая концентрация /-го компонента в растворе, полученная по первой и второй электрофореграммам соответственно. мг/дм3.
Г радуировочная зависимость признается стабильной, если выполняется условие:
(с, – cjs 0.01 .сше. (4)
где Cki — действительное значение массовой концентрации компонента в контрольной смеси (см.7,3.3), _ мг/дм3:
С, — среднеарифметическое значений массовой концентрации компонента в контрольной смеси.
полученных по первой и второй электрофореграммам. мг/дм3:
G — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики. %.
Значение бпринимают равным О.б&гдеб— доверительные границы допускаемой относительной погрешности (см. таблицу 4).
6
ГОСТ Р 53193—2008
Если условие (4) не выполняется, то промывают капилляр по 7.5.2. процедуру контроля повторяют и при повторном получении неудовлетворительного результата контроля градуировку прибора проводят заново.
8 Проведение испытаний
8.1 Подготовка проб
Если проба не содержит осадка или взвешенных частиц, то ее центрифугируют в течение 5 мин при частоте вращения 5000 мин-1. переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Эппекдорф и анализируют согласно 8.2.
Образцы газированных напитков предварительно дегазируют. Для этого порцию напитка не менее 50 см* помещают в коническую колбу вместимостью 100 см3 и подключают к водоструйному насосу. Дегазируют в течение 10 — 15 мин. После дегазирования пробу центрифугируют, как описано выше, и направляют на анализ.
Пробы налитков, в которых определяют содержание аскорбиновой кислоты, вскрывают непосредственно перед проведением испытаний. Вскрытую пробу хранят не более 6 ч плотно закупоренной, не допуская попадания воздуха и прямых солнечных лучей.
Рекомендуется после вскрытия упаковки пробу законсервировать добавлением раствора трилона Б. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой помещают 10 см3 раствора трилона Б (см. 7.2.5). затем пипеткой отбирают 50 см3 анализируемой пробы, помещают в эту же мерную колбу и доводят до метки дистиллированной водой. Тщательно перемешивают. Срок хранения законсервированной пробы в холодильнике при температуре (4 ±2) *С — не более Зсут.
Если проба содержит осадок или взвешенные частицы, то ее гомогенизируют и отбирают две аликвоты. Каждую аликвоту центрифугируют в течение 5 мин при частоте вращения 5000 мин’1. Затем отбирают верхний надосадочный слой жидкости и переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Элпендорф для дальнейшего анализа. Если такую пробу необходимо разбавить (см. 8.2) или законсервировать раствором трилона Б. то ее сначала тщательно перемешивают, затем отбирают аликвоту, переносят в соответствующую мерную колбу, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. После этого разбавленную и/или законсервированную пробу центрифугируют 5 мин при частоте вращения 5000 мин-1, надосадочный слой переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Эппендорф и анализируют согласно 8.2.
8.2 Проведение измерений
Регистрируют не менее двухэлектрофореграмм проб, подготовленных по8.1. Проверяют правильность автоматической разметки пиков и проводят идентификацию компонентов в пробе по совпадению времен миграции компонентов в пробе и при построении градуировочной зависимости (ширина окна идентификации 5 %).
При возникновении сомнений при идентификации компонентов рекомендуется использовать метод добавок. Увеличение высоты соответствующего пика подтверждает правильность идентификации. Добавка должна составлятьот 50 % до 150 % от массовой концентрации компонента в пробе.
Если анализируемые компоненты обнаружены, то определяют их массовую концентрацию для каждой элекгрофореграммы с использованием градуировочной характеристики, установленной по 7.6.
Проверяют сходимость полученных значений массовой концентрации компонентов по формуле (3). Если условие (3) выполняется, то в качестве значения массовой концентрации соответствующего компонента в подготовленной пробе принимают среднеарифметическое полученных значений. Если условие не выполняется, проводят повторную регистрацию электрофореграмм после устранения причины нестабильности.
Если измеренные значения массовой концентрации одного или нескольких компонентов в пробе превышают верхние границы диапазонов градуировочной характеристики, топробу разбавляют дистиллированной водой так. чтобы массовая концентрация компонентов в полученном растворе находилась в середине линейного диапазона измеряемых значений массовой концентрации, и повторяют регистрацию электрофореграмм.
Коэффициент разбавления пробы Q, вычисляют по формуле
7
ГОСТ Р 53193—2008
где V„ — объем разбавленной пробы, см3;
Va — объем аликвотной пориии пробы, взятой для разбавления, см3.
Примеры электрофореграмм приведены в приложении А.
Примечание — На электрофореграммах некоторых проб могут наблюдаться дополнительные пики, принадлежащие, в частности, витаминам группы В (после пика кофеина), ванилину (после пика аскорбиновой кислоты) и синтетическим пищевым красителям (перед или после пика вцесульфама К), в случае неудовлетворительного разделения пиков аскорбиновой кислоты и ванилине (разрешение меньше 0.7) необходимо изменить условия анализа, установив температуру 45 *С, и построить градуировочную характеристику для аскорбиновой кислоты при этих условиях.
9 Обработка результатов испытаний
Массовую концентрацию компонентов в пробе вформеопределения X, мг/дм3. вычисляют по фор.
муле
х=хИ1М-о1о2. (6)
гдеХИ)М — результат измерения массовой концентрации компонента в пробе по 8.2. мг/дм3:
Q, — коэффициент разбавления пробы ло 8.2. Если разбавление не проводилось, то Q, =1;
Q2 — коэффициент разбавления пробы лриконсераациитрилоном Б по 8.1 (Q2=2). Если консервация проб не проводилась, то 02 =1.
При анализе проб, не содержащих осадка и взвешенных частиц, в качестве результата измерения массовой концентрации определяемого компонента принимается результат единичного измерения, вычисляемый по формуле (6).
Если анализируются две аликвотные порции (пробы, содержащие осадок или взвешенные частицы). то за результат измерения массовой концентрации компонента в пробе принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, для которых выполняется условие;
0.01 гХ. (7)
гдеХмам. — максимальный результат параллельного определения. мг/дмэ:
ХШ1Н — минимальный результат параллельного определения, мг/дм3; г_— значение предела повторяемости (см. таблицу 4). %.
X — среднеарифметическое значение результатов параллельных определений, мг/дм3.
При невыполнении неравенства (7) используют методы проверки приемлемости результатов параллельных определений и установления окончательного результата измерений согласно ГОСТ Р ИСО 5725-6 (подраздел 5.2).
Если результаты измерений массовой концентрации компонентов необходимо предоставить в пересчете на определенные формы нормирования, то значения, полученные по формуле (6). умножают на соответствующие коэффициенты пересчета. Например, для наиболее часто встречающихся солей бензойной и сорбиновой кислот значения коэффициентов пересчета приведены в таблице 3.
Таблице 3
|
«орка определения |
Форма норыироеания |
Коэффициент пересчета |
|
Бензойная кислота |
Бензоат натрия |
1.18 |
|
Бензоат калия |
1.31 |
|
|
Сорбиноввя кислота |
Сорбат натрия |
1.20 |
|
Сорбат калия |
1.34 |
Результаты измерений регистрируют в протоколе испытаний согласно ГОСТ Р ИСО/МЭК17025. Результат измерений представляют в ведеХ±д мг/дм3. либоХ±и. мг/дм3. гдеX— результат измерений массовой концентрации определяемого компонента, мг/дм3;
д — доверительные границы абсолютной погрешности измерений массовой концентрации определяемого компонента при доверительной вероятности Р=0,95. мг/дм3. вычисляемые по формуле
8
ГОСТ Р 53193—2008
Л » Ц01Ш. (8)
где 8 —доверительные границы относительной погрешности результатов измерений при доверитель* ной вероятности Р-0.95 по таблице 4. %;
U — расширенная неопределенность при коэффициенте охвата к – 2, мг/дм3. вычисляемая по фор* муле
U=0.01.X-UOTM. (9)
где Uoni —относительная расширенная неопределенность при коэффициенте охвата к- 2 по таблице 4.
%.
Допускается результат измерения представлять в виде Х±^, мг/дм3. при условии А, £ д, где Др — значение показателя точности измерений {доверительные границы абсолютной погрешности измерений), установленное при реализации настоящего метода алаборатории и обеспечивав* мое контролем стабильности результатов измерений, мг/дм3; или Х± U„, мг/дм3. при условии Un £ U,
где ип — значение расширенной неопределенности, установленное в лаборатории при реализации настоящего метода в лаборатории согласно [7] или [8] и обеспечиваемое контролем стабильности результатов измерений, мг/дм3.
Примечание — При необходимости в соответствии с ГОСТ РИСО 5725-6 (подраздел 5.2) для результата измерений указывается число параллельных определений и способ установления результата измерений.
10 Метрологические характеристики
Метод обеспечивает получение результатов измерения с метрологическими характеристиками, не превышающими значений, приведенных в таблице 4.
Таблица 4 — Метрологические характеристики для доверительной вероятности Р ■ 0.95
|
Диапазон измерений, мг/дм3 |
Относительное значение предела повторяености г. Ч |
Относительное значение предела воспроизводимости Я. % |
Доверительные границы* допускаемой относительной погрешности t ft. % |
|
Кофеин, сахаринат натрия |
|||
|
От 10 до 1000 еключ. |
11 |
17 |
12 |
|
Аскорбиновая кислота, бензойная кислоте, ацесульфам К |
|||
|
От 10 до 1000 еключ. |
17 |
28 |
20 |
|
Сорбиновая кислоте |
|||
|
От Ю до Ю00 еключ. |
22 |
39 |
28 |
|
* Установленные численные значения доверительных границ допускаемой относительной погрешности соот* |
|||
|
ветствуют численным значениям относительной расширенной неопределенности U |
при коэффициенте охав* |
||
|
та к ■ 2. |
Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях (Х1ла6 и Х2ла6. мг/дм3). проверяют согласно ГОСТ Р ИСО 5725*6 (пункт 5.3.2) с использованием значений предела воспроизводимости. приведенных в таблице 4.
11 Контроль качества результатов измерений
Контроль качества результатов измерений в лаборатории предусматривает проведение контроля стабильности результатов измерений с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725*6 (раздел 6).
9
ГОСТ Р 53193—2008
Приложение А (справочное)
Примеры электрофореграмм
А.1 Примеры электрофореграмм приведены на рисунках А.1 — А З.
1 — кофеин <80 мг/дм3), 2 — аскорбиновая кислота <40 мгГдм3). 0 — оорбиповая кислота (40 мг/дм3); 4 — бензойная кислота (80 мг/ды3); 5 — сакаринат натрия (80 мг^дм3): б — ацесульфам К (80 мг/ди3)
РисунокА.1 — Электрофорегрвмма градуировочной смеси
1 — кофеин; 2 — бензойная кислота; 3 — ацесульфам К
Рисунок А.2 —Элекгрофореграмма пробы тонизирующего налитка
10
ГОСТ Р 53193—2008
1 — кофеин; 2 — аскорбиновая кислота; 3 — ванилин
Рисунок А.З — Фрагмент электрофореграммы пробы энергетического напитка (разбавлен а пять раз)
Библиография
(1} ТУ 4215-023-20S06233—2006 {2J ТУ 62-2-300—80
[3] ТУ 6-55-221-879—88
(4] ТУ 6-09-64— 75 [5} ТУ 6-092785—78 (6] АЖРЦЗ.036.001 ТУ
т
(8] Р S0.1.060—2006
Системы капиллярного электрофореза «Капель»
Пробирки одноразовые типа Эплендорф Фильтры иеллюлозно-ацетатные Додецилсульфат натрия Бензоат натрия, ч.
МультиХром. Система для сбора и обработки хроматографических данных
Руководство ЕВРАХИМ/СИТАК «Количественное описание неопределенности в аналитических измерениях» (2-е изд.. 2000) — лер. с англ. — СПб. ВНИИМ им. Д.И. Менделеева. 2002
Рекомендации по межгосударственной стандартизации «Статистические методы. Руководство по использованию оценок повторяемости, воспроизводимости и правильности при оценке неопределенности измерений»
11
ГОСТ Р 53193—2008
УДК 633.1:006.354 ОКС67.160.Ю Н71
67.160.20
ОКП91 8514 91 8519
Ключевые слова: напитки, налитки алкогольные, напитки безалкогольные, методы испытаний, капиллярный электрофорез, консерванты, подсластители, кофеин, бензойная кислота, аскорбиновая кислота. сорбиновая кислота, сахаринат натрия, ацесульфам К
Редактор П.В. Коретникоаа Технический редактор Н.С. Гоишамоеа Корректор 6.Е. Нестерове Компьютерная верстка А Н. Золотаревой
Сдано в набор 09.12.2003. Подписано в печать 12.01.2010. Формат 60 * 84Бумага офсетная. Гарнитура Ариал. Печать офсетная. Уел. печ. л. 1.86. Уч.-иэд. л. 1.40. Тираж 333 экэ. Зак. 17.
ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ*. 123995 Москва. Гранатный пер . 4. info@goslmlo ти
Набрано во на ПЭВМ.
Отпечатано а филиале ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ* — тип. «Московский печатник». 105062 Москва. Лялин пер., в.
