ГОСТ Р 57480-2017 Продукты убоя птицы, продукция из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Метод выявления сальмонелл ускоренным способом

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ГОСТР

57480-

2017

ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

Метод выявления сальмонелл ускоренным способом

Издание официальное

Москва

Стандартииформ

2017

ГОСТ Р 57480—2017

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности — филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения Федерального научного центра «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства» Российской академии наук (ВНИИПП)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 мая 2017 г. Nv467-от

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. No 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе к Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет ()

© Стандартинформ.2017

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

ГОСТ Р 57480—2017

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ. ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

Метод выявления сальмонелл ускоренным способом

Poultry slaughtering products, poultry meat products and environment production objects. Salmonella identification by quick method

Дата введения — 2018—07—01

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется:

• на продукты убоя птицы (тушки, части тушек, жир-сырец, кожу, субпродукты, мясо птицы механической обвалки, кость птицы пищевую, сырье колпагенсодержащее), полуфабрикаты из мяса птицы, в том числе высокой степени готовности, и яичные продукты, предназначенные для пищевых целей (далее — продукты);

• продукцию из мяса птицы и яиц сельскохозяйственной птицы, готовую кулотреблекию—колбасные. кулинарные изделия, консервы и др. (далее — готовые продукты);

• объекты окружающей производственной среды (технологическое оборудование, тара, инвентарь. стены и пол производственных цехов, воздух в производственных цехах, одежда и поверхность рук работников).

Настоящий стандарт устанавливает ускоренный метод качественного обнаружения сальмонелл (далее — бактерии рода Salmonella) с использованием тест-пластины, содержащей дегидратированный питательный гелеобразующий хромогенный субстрат на подложке.

2 Нормативные ссылки

8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда, вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 5962 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия ГОСТ 6709 вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 7702.2.0 Продукты убоя птицы, полуфабрикаты из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям ГОСТ 8756.0 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию ГОСТ 9792 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 10444.1 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ ISO 11133 Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление. производство, хранение и определение рабочих характеристик питательных сред

Издание официальное

1

ГОСТ Р 57480—2017

ГОСТ IS016140 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ 28489 Микроскопы световые. Термины и определения

ГОСТ 31468 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл

ГОСТ 31659 (ISO 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella

ГОСТ Р 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробеэопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 52313 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты пищевые. Термины и определения

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных еденную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта а ссылочный стандарт, на который двна датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применятьбеэ учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены.то положение. в котором дане ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В мастоящемстандартв применены термины по ГОСТ Р 52313, ГОСТ 7702.2.0. ГОСТ31468.атакже следующий термин с соответствующим определением:

3.1 тест-пластина для определения бактерии рода Salmonella: Дегидратированная дифференциально-диагностическая среда на подложке, содержащая хромогенные субстраты и растворимое в холодной воде гелеобразующее вещество.

4 Сущность метода

Метод выявления бактерии рода Salmonella ускоренным способом основан на высеве определенного количества пробы в жидкие неселективные и селективные среды с последующим высевом на плотную дифференциально-диагностическую среду, выделении культур, имеющих типичные для бактерий рода Salmonella морфологические, культуральные признаки, с последующей их идентификацией по биохимическим свойствам и серологическим реакциям.

5 Требования безопасности

5.1 Общие требования проведения микробиологических исследований, в том числе требования безопасности к работе с микроорганизмами III и IV групп патогенности — по ГОСТ ISO 7218. [1].-

5.2 При подготовке и проведении анализа необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

5.3 Помещение, в котором проводят анализ, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности е соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.4 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТР 12.1.019.

5.5 Требования к персоналу — по ГОСТ ISO 7218.

2

ГОСТ Р 57480—2017

6 Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды

Аппаратура, материалы, реактивы и питательные среды — по ГОСТ 7702.2.0 со следующими дополнениями:

• микроскоп биологический, обеспечивающий просмотр в проходящем свете, с увеличением 900х—1000х по ГОСТ28489-

• тест-пластина для определения бактерии рода Salmonella по документации изготовителя;

• диск для биохимической идентификации бактерии рода Salmonella, содержащий биохимический субстрат, облегчающий биохимическое подтверждение присутствия бактерии рода Salmonella по документации изготовителя;

• среда для неселективного предварительного обогащения — эабуференная пептонная вода по ГОСТ 7702.2.0;

• бульон Рапаппорта-Вассилиадиса (R-V R10) по 8.4;-

• распределитель для тест-пластин по документации изготовителя;

• губка (спонж) для отбора Образцове нейтрализующим раствором по ГОСТ 7702.2.0;-

• пептонно-солевой раствор для приготовления разведений по ГОСТ 7702.2.0;

• мясо-лептонный агар по ГОСТ 7702.2.0;

• сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные О-сыворотки; VI-. Н-агглютинирую-щие сыворотки для серологической идентификации бактерии рода Salmonella по ГОСТ 7702.2.0;

• физиологический раствор по ГОСТ 7702.2.0;

• дистиллированная вода по ГОСТ 6709, ГОСТ IS011133;

• спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

7 Подготовка к проведению анализа

7.1 Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 7702.2.0, ГОСТ 9792, ГОСТ 8756.0.

Для отбора проб окружающей среды используют губку (спонж) с нейтрализующим раствором, не содержащую антимикробных веществ.

Размер участка пробы для проверки присутствия или отсутствия патогенов на поверхности составляет 100 см² (10 х 10 см). Забирая пробу с помощью губки, покрывают весь участок в двух направлениях (слева направо, затем сверху вниз).

7.2 Подготовка посуды — по ГОСТ 31468.

7.3 Подготовка тест-лпастин к анализу — по [2].-

7.4 Температура проб перед анализом должна быть в пределах комнатной температуры от 18 *С до22*С.

8 Приготовление питательных сред, сыворотки и селективной добавки

8.1 Пептонно-солевой раствор для приготовления разведений — по ГОСТ 7702.2.0.

8.2 Среда для неселективного предварительного обогащения — эабуференная пептонная вода — по ГОСТ 7702.2.0.

8.3 Селективная добавка к среде неселективного предварительного обогащения Состав:

• малахитовый зеленый оксалат:

. цефсулодин натрия;

• стрептомицина сульфат;

• новобиоцин натрия;

• налидиксин натрия.

Весовые характеристики и приготовление — в соответствии с инструкцией изготовителя.

8.4 Бульон Раппапорта-вассилиадиса (R-VR10)

Состав:

• хлорид магния (безводный) 13,4 г;

• хлорид натрия 7.2 г.

• казеиновый пептон 4.54 г;

• дигидроортофосфат калия 1.45 г:

• малахитовый зеленый 0,036 г;

• дистиллированная вода 1000,0 см³.

3

ГОСТ Р 57480—2017

Приготовление:

26.6 г сухой среды растворяют в 1000 см³ дистиллированной воды. Тщательно перемешивают, при необходимости нагревают до полного растворения порошка. Стерилизуют при температуре 116 *С в течение 15 мин. Показатель pH должен соответствовать (5.1 ±0,2}ед. pH при 25 ®С.

8.5 Мясо-лелтонный агар — по ГОСТ 7702.2.0.

8.6 Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные О-сыворотки. VK Н-агглютиниру-ющие сыворотки — в соответствии с инструкцией изготовителя.

8.7 Питательные среды перед использованием контролируют по ГОСТ IS011133.

8.8 Контроль сред на стерильность

Среды проверяют на стерильность путем выдержки в термостате при (37 ± 1) *С в течение 48 ч. Если после этого на плотных питательных средах не обнаруживаются колонии микроорганизмов, а в жидких средах нет помутнения или осадка, свидетельствующих о росте микроорганизмов, они считаются стерильными.

9 Проведение анализа

9.1 Предварительное обогащение в неселективной среде

Для приготовления исходной суспензии используют неселективную средусселективной добавкой.

Перед использованием неселективную среду по 8.2 вместе с селективной добавкой пов.З нагревают на водяной бане до температуры (41.5 ± 1.0) °С. Подготовленную среду для неселективного обогащения с селективной добавкой в асептических условиях инокулируют пробой продукта массой (25 ± 0.1 )га пакеты сфильтром. Соотношение между количеством высеваемой пробы и количеством неселективной среды — 1:9.т.в. (25 ±0.1 )гпробы на (225 ±0.1)см³ среды. Тщательно гомогенизируют в течение 2 мин.

Для проб окружающей среды соотношение между количеством высеваемой пробы и количеством неселективной среды — 1:9. т. е. губка на (225 ± 0.1) см³ среды.

Посевы инкубируют при (41.5 ± 1,0) *С в течение (18—24) ч.

9.2 Обогащение в селективной среде

Культуры из среды для предварительного неселективного обогащения пересевают в среду селективного обогащения — бульон Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) (см. 8.4).

Для этого 0.1 см³ культуры, полученной по 9.1, пересевают в (1011.0) см³ бульона Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) по 8.4.

Посевы на бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10) инкубируют при температуре (41.5 ± 1.0) *С в течение (8—24) ч.

Допускается высевать культуры из среды неселективного обогащения проб продуктов, готовых к употреблению, непосредственно на дифференциально-диагностическую среду (тест-пластину), исключая этап обогащения в селективной среде на бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10).

9.3 Пересев на дифференциально-диагностические среды

После инкубирования на селективной среде — бульоне Раппапорта-Вассилиадиса (R-V R10), проводят высев посевного материала на дифференциально-диагностическую среду.

Для получения отдельных хорошо изолированных колоний бактериологической петлей диаметром Змм³ берут посевной материал и проводят высев непрерывным штрихом на поверхность геля тест-ллас* тины. Рукой в перчатке проводят разглаживающим движением по поверхности пленки тест-лпастины. оказывая на нее равномерное давление, для удаления пузырьков воздуха из области высева.

Тест-пластины инкубируют пленкой вверх при температуре (41.5 ± 1.0) ^вС в течение (24 ± 2) ч, укладывают в стопки в количестве не более 20 пластин.

После инкубирования проводят просмотр тест-пластин на присутствие типичных колоний для бактерий рода Salmonella.

Бактерии рода Salmonella образуют на тест-пластине колонии цвета от красного до коричневого с желтой зоной и/или пузырьком газа.

При отсутствии типичных колоний в посевах на дифференциально-диагностической среде работу с посевами прекращают, и конечный результат определяют как отсутствие бактерий рода Salmonella в анализируемой пробе (массе, объеме) продукта.

ГОСТ Р 57480—2017

9.4 Идентификация

9.4.1 биохимическая идентификация

Если типичные колонии бактерий рода Salmonella присутствуют на тест-пластине, на верхней пленке тест-пластины обводят не менее пяти изолированных типичных колоний несмываемым сверхтонким маркером и переходят к проведению идентификации бактерий рода Salmonella по биохимическим свойствам.

Для определения биохимических свойств используют тест-пластину с типичными колониями.-

Поднимают верхнюю пленку тест-пластины и вставляют диск для биохимической идентификации, разместив его на геле катящим движением во избежание попадания пузырьков воздуха. Закрывают тест-пластину. Рукой в перчатке аккуратно проводят разглаживающим движением по поверхности пленки, оказывая на нее равномерное давление.

Тест-пластину и диск инкубируют при температуре (41,511.0) ^вС в течение 4—5 ч в горизонтальном положении диском вверх, укладывая по высоте не более 20 пластин.

Типичные культуры бактерий рода Salmonella показывают изменение цвета колоний на зеленый, синий, темно-синий с ореолом темно-фиолетового цвета вокруг колоний.

Принцип биохимической идентификации с применением диска основан на комбинированном действии двух хромогенных субстратов на бета-галактозидазу и бета-глюкоронидаэу. Распад хромогенных ферментов сопровождается изменением цвета и образованием ореола темно-фиолетового цвета вокруг колоний.

Колонии, которые сохранили тот же красный, темно-красный или коричневый цвет без темно-фиолетового ореола, не являются подтвержденными по биохимическим свойствам.

9.4.2 Серологическая идентификация

Серологическую идентификацию для подтверждения принадлежности к бактериям рода Salmonella проводят с культурами, предварительно пересеянными на поверхность мясо-лептонного агара.

Для этого поднимают верхнюю пленку тест-пластины и петлей снимают колонию с геля или диска, затем штриховым движением колония переносится на мясо-пептоиный агар.

Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1) ^вС в течение 18—24 ч. затем проводят серологическую идентификацию по ГОСТ 31659.

10 Обработка результатов

10.1 Результаты оценивают по каждой пробе в отдельности.

10.2 Результаты записывают следующим образом: бактерии рода Salmonella обнаружены или не обнаружены в определенном количестве г (см³) продукта.

11 Валидация метода

Валидация метода проведена с помощью межлабораторных испытаний по ГОСТ IS016140.

S

ГОСТ Р 57480—2017

Библиография

(1) СП 1.3.2322-08 Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами

III—IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 26 января 2008 г.

(2) МУК 4.2.2684-11 Методические указания «Методы микробиологического контроля объектов окружающей

среды и пищевых продуктов с использованием летрифильмоа». утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29 июня 2011 г.

УДК 637.54:579.67:006.35 ОКС 67.120.20

Ключевые слова: мясо птицы, субпродукты, полуфабрикаты, бактерии рода Salmonella, питательные среды, отбор проб, биохимические свойства, контроль микробиологических исследований

БЗ 7—2017/93

Редактор А.Э. Попово Технический редактор В. Н. Прусакова Корректор И А Королева Компьютерная верстка И.А НапеОкопой

Сдано в набор 14.06.2017. Подписано в печать 19.06.2017. Формат 60 » 84^. Гарнитура Ариел. Уел. печ. л. 0.93. Уч.-иэд. л. 0.74. Тираж 32 мз. Зак. 983.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Издано и отпечатано во . 123995 Москва, Гранатный пор.. 4. wnriv.goebolo.ru