ГОСТ Р ИСО 11138-1-2000 Стерилизация медицинской продукции. Биологические индикаторы. Часть 1. Общие требования

>

ГОСТ Р ИСО 11138-1-2000

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Стерилизация медицинской продукции БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИНДИКАТОРЫ Часть 1

Технические требования

Издание официальное

ГОССТАНДАРТ РОССИИ Москва

Р. ЗДРАВООХРАНЕНИЕ. ПРЕДМЕТЫ САНИТАРИИ И ГИГИЕНЫ

Группа Р26 к ГОСТ Р ИСО 11138—1—2000 Стерилизация медицинской продукции. Биологические индикаторы. Часть 1. Технические требования

(ИУС №4 2001 г.)

• 1 ПОДГОТОВЛЕН Ассоциацией инженеров по контролю микрозагрязнений (АСИНКОМ), Московской медицинской академией им. И.М. Сеченова и Испытательным лабораторным центром Московского городского центра дезинфекции

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 383 «Стерилизация медицинской продукции» Госстандарта России

• 2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 10 августа 2000 г. № 205-ст

• 3 Настоящий стандарт содержит аутентичный текст международного стандарта ИСО 11138-1—94 «Стерилизация медицинской продукции. Биологические индикаторы. Часть 1: Общие требования»

• 4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

© ИПК Издательство стандартов, 2000

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России

Содержание

• 1 Область применения

• 2 Нормативные ссылки

• 3 Определения

• 4 Общие требования к продукции, производству и маркировке

• 5 Определение резистентности

Приложение А Определение числа живых тест-микроорганизмов

Приложение В Метод кривой выживания

Приложение С Фракционный негативный анализ (метод MPN для последовательного определения величины D с использованием ограниченного метода Спирмана-Карбера)

Приложение D Расчет величины D с использованием ограниченного метода Спирмана-Карбера

Приложение Е Характеристики выживания—гибели

Приложение F Определение ингибирования роста материалами носителей и пер

вичных упаковок во время стерилизации

Введение

Биологические индикаторы используются для оценки эффективности процесса стерилизации медицинской продукции и других целей. К медицинской продукции относят лекарственные средства и медицинские изделия.

Применение биологических индикаторов определено изготовителем и указано в маркировке. Использование несоответствующих индикаторов может привести к ошибочным результатам.

Биологические индикаторы должны всегда использоваться в комбинации с физическим и/или химическим контролем эффективности процесса стерилизации. Если колебания физико-химических показателей процесса стерилизации выходят за допустимые пределы, процесс стерилизации всегда должен рассматриваться как неудовлетворительный независимо от результатов контроля с помощью биологических индикаторов.

Эффективность биологических индикаторов может зависеть от условий хранения до момента их применения, методов применения или действий после завершения процесса. Поэтому необходимо выполнять рекомендации изготовителя в отношении хранения и применения. Биологические индикаторы должны быть переданы для лабораторного контроля как можно скорее после их использования в процессе стерилизации. Не допускается использовать биологические индикаторы после истечения срока годности, указанного изготовителем.

Оценка эффективности процессов стерилизации с помощью биологических индикаторов должна выполняться персоналом, подготовленным соответствующим образом.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Стерилизация медицинской продукции БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИНДИКАТОРЫ

Часть 1

Технические требования

Sterilization of health care products. Biological indicators. Part 1. Technical requirements

Дата введения 2001—07—01

1 Область применения

• 1.1 Настоящий стандарт устанавливает общие требования к производству, маркировке и работе оборудования при изготовлении биологических индикаторов и суспензий, применяемых для валидации и контроля процессов стерилизации.

Примечание — Конкретные требования к биологическим индикаторам для определенных видов стерилизации — по ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

Стандарт не содержит требований к продукции, непосредственно инокулированной микроорганизмами, методикам культивирования жизнеспособных микроорганизмов, а также к биологическим индикаторам, в которых используют более одного вида или штамма микроорганизмов, инокулированных в носителе.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 9002—96 Системы качества. Модель обеспечения качества при производстве, монтаже и обслуживании

ГОСТ Р ИСО 11138-3—2000 Стерилизация медицинской продукции. Биологические индикаторы. Биологические индикаторы для стерилизации влажным теплом

ГОСТ Р ИСО 11138-2—2000 Стерилизация медицинской продукции. Биологические индикаторы. Биологические индикаторы для стерилизации окисью этилена

3 Определения

В настоящем стандарте применяют термины с соответствующими определениями’

• 3.1 биологический индикатор — БИ (biological indicator — BI): Готовый к применению иноку-лированный носитель в первичной упаковке, обеспечивающий определенную резистентность (устойчивость) к конкретному режиму стерилизации.

• 3.2 носитель (carrier): Удерживающий материал, на который нанесены тест-микроорганизмы.

• 3.3 первичная упаковка (primary pack): Система, предохраняющая инокулированный носитель от повреждения и контаминации, но не препятствующая проникновению стерилизующего агента (агентов).

• 3.4 вторичная упаковка (secondary pack): Упаковочная тара, в которую помещены биологические индикаторы для транспортирования и хранения.

• 3.5 инокулированный носитель (inoculated carrier): Носитель, на который нанесено определенное количество тест-микроорганизмов.

• 3.6 тест-микроорганизм (test organism): Микроорганизм, используемый для изготовления инокулированных носителей.

Издание официальное

• 3.7 число живых тест-микроорганизмов (viable test organism count): Число живых тест-микроорганизмов в единице объема суспензии или на инокулированном носителе, определяемое по росту дискретных колоний при определенных условиях культивирования.

• 3.8 инактивация (inactivation): Потеря тест-микроорганизмами способности к росту, прорастанию и/или размножению при определенных условиях культивирования.

• 3.9 условия культивирования (culture conditions): Указанная изготовителем комбинация условий для обеспечения роста, прорастания и/или размножения тест-микроорганизмов, включающая питательную среду, продолжительность и температуру инкубации.

• 3.10 признанная коллекция культур (recognized culture collection): Международная коллекция, находящаяся под юрисдикцией Будапештского договора о международном признании коллекций микроорганизмов для целей патентования и регулирования.

• 3.11 величина (параметр) Z); Величина десятикратного сокращения (D value): Время выдержки или поглощенная доза излучения, необходимые для уменьшения популяции тест-микроорганизмов в 10 раз при определенных условиях обработки.

• 3.12 кривая выживания (survivor curve): Графическое представление зависимости процесса инактивации от времени выдержки (поглощенной дозы излучения) при определенных условиях.

• 3.13 устройство для нспыташш процесса (process challenge device): Устройство, моделирующее наихудшие условия воздействия стерилизующего агента (агентов) на объект среди стерилизуемых объектов.

Примечания

• 1 Устройство для испытания процесса должно быть построено таким образом, чтобы биологический индикатор можно было расположить в месте, наиболее труднодоступном для стерилизующего агента (агентов).

• 2 Конструкция устройства для испытания процесса стерилизации зависит от вида стерилизуемых объектов и процедуры стерилизации. Биологический индикатор не должен влиять на функционирование устройства.

• 3 В некоторых устройствах вместо биологического индикатора может быть использован инокулирован-ный носитель.

  • 3.14 колоннеобразующая единица — КОЕ (сокту-fonning unit — CFU): Видимая колония микроорганизмов, выросшая из одной клетки или из группы клеток.

  • 3.15 автономный биологический индикатор (self-contained biological indicator): Биологический индикатор, первичная упаковка которого содержит питательную среду, необходимую для выращивания тест-микроорганизмов.

  • 3.16 окно выживания-гибели (survival-kill window): Интервал дозы излучения или времени выдержки в процессе стерилизации при определенных условиях, в течение которых осуществляется переход от прорастания всех биологических индикаторов (экспозиция выживания) к отсутствию прорастания всех биологических индикаторов (экспозиция гибели).

  • 3.17 номинальная популяция (nominal population): Заданное число микроорганизмов.

Примечание — Обнаруженное число микроорганизмов будет отличаться от номинальной популяции микроорганизмов в зависимости от погрешности использованных методик инокуляции и методов обнаружения жизнеспособных клеток.

• 3.18 резистомер (resistometer): Оборудование, предназначенное для создания комбинации определенных физико-химических параметров процесса стерилизации с определенными допусками.

4 Общие требования к продукции, производству и маркировке

• 4.1 Производственный контроль н контроль качества

• 4.1.1 Все операции, предусмотренные настоящим стандартом, должны контролироваться в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 9002.

• 4.1.2 Необходимо предусматривать регистрацию компонентов производства.

Производственные компоненты должны включать все материалы и элементы, входящие в состав или находящиеся в прямом контакте с суспензией тест-микроорганизмов, инокулированным носителем или биологическим индикатором.

• 4.1.3 Конечный продукт, поставляемый изготовителем (суспензия, инокулнрованный носитель или биологический индикатор), не должен содержать тест-микроорганизмов других видов в количестве, способном ухудшить потребительские свойства продукции. Соблюдение этого требования при производстве обеспечивается валидацией производства, управлением, текущим контролем и записью производственных параметров.

• 4.2 Тест-микроорганизмы

• 4.2.1 Штаммы тест-микроорганизмов не должны требовать мер изоляции при работе с ними.

• 4.2.2 Тест-микроорганизмы должны принадлежать к определенному штамму, взятому из обязательной коллекции культур, и однозначно идентифицироваться с эталонным номером этой коллекции культур.

• 4.2.3 Если штамм предназначенного для использования тест-микроорганизма не принадлежит к обязательной коллекции культур, изготовитель несет ответственность за отнесение конкретного штамма к обязательной коллекции.

• 4.2.4 Для каждой серии суспензии тест-микроорганизмов необходимо:

а) зарегистрировать происхождение инокулята отнесением его к соответствующей коллекции культур;

б) удостоверить его идентичность и чистоту.

Методы, используемые для поддержания культур тест-микроорганизмов, должны обеспечить предохранение от контаминации и вредных изменений их неотъемлемых качеств. Контрольные тесты являются специфическими для каждого штамма тест-микроорганизма и должны быть документированы и валидированы изготовителем.

• 4.3 Суспензии тест-микроорганизмов

  • 4.3.1 Питательная среда и условия инкубирования, используемые для суспензии тест-микроорганизмов, должны быть определены изготовителем. Эти условия должны обеспечивать последовательное воспроизводство суспензий тест-микроорганизмов в соответствии с требованиями настоящего стандарта, ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

  • 4.3.2 Методы подсчета микроорганизмов и последующей обработки должны обеспечить отсутствие остатков питательной среды в суспензии, используемой для инокуляции носителей. Указанные остатки могут быть помехой при работе с инокулированным носителем или биологическим индикатором.

Если изготовитель показал, что остатки питательной среды не оказывают вредного влияния на работу с инокулированным носителем или биологическим индикатором, указанное требование не учитывается.

• 4.3.3 Изюювигели суспензий гесг-.микрооршнизмов или биологических индикаюров должны письменно подтвердить, что биологические индикаторы и суспензия тест-микроорганизмов получены из культуры, взятой из коллекции культур.

• 4.3.4 Если суспензия тест-микроорганизмов предназначена для приготовления инокулирован-ных носителей или инокулированного продукта, каждый контейнер, содержащий суспензию тест-микроорганизмов, должен сопровождаться информацией, содержащей:

• a) название тест-микроорганизма;

• b) название или аббревиатуру коллекции культуры, откуда был получен тест-микроорганизм, и ссылку на номер штамма;

• c) номинальный объем суспензии в миллилитрах (или в граммах, если тест-микроорганизмы представлены не в форме суспензии);

• d) единый код, по которому может быть восстановлена история изготовления;

• e) число жизнеспособных клеток в миллилитре суспензии;

0 рекомендуемые условия хранения;

• g) срок годности или срок хранения;

• h) название изготовителя, торговую марку, адрес и другие средства идентификации;

• i) инструкции по утилизации.

• 4.3.5 По требованию потребителя изготовитель обязан представить информацию о характеристиках резистентности и других характеристиках суспензии. Эти данные должны быть согласованы между покупателем и изготовителем.

• 4.3.6 Условия хранения суспензий тест-микроорганизмов и срок их годности должны быть указаны изготовителем. Эти условия должны контролироваться в период храпения. Они должны поддерживать суспензии тест-микроорганизмов в таком состоянии, чтобы они соответствовали требованиям настоящего стандарта, ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

• 4.3.7 Должно быть установлено число жизнеспособных микроорганизмов в суспензии.

По требованию потребителя показатель прорастаемости тест-микроорганизмов определяют через процентное отношение числа жизнеспособных тест-микроорганизмов, обнаруженных с помощью микроскопии.

• 4.3.8 Изготовитель должен гарантировать транспортирование третьей стороне в контролируемых условиях, сравнимых с условиями хранения суспензий тест-микроорганизмов.

• 4.4 Носитель, первичная упаковка и конструкция

  • 4.4.1 Носитель и первичная упаковка не должны содержать загрязнений (физических, химических или микробиологических), которые могли бы ухудшить характеристики биологического индикатора.

  • 4.4.2 Носитель и первичная упаковка не должны разрушаться в предусмотренном для них процессе стерилизации, вследствие чего могли бы измениться характеристики инокулированного носителя.

Носитель должен выдерживать транспортирование в первичной и вторичной упаковках, а также обеспечивать работу с ним в месте использования без повреждений.

Конструкция носителя и/или первичной упаковки должна предусматривать:

• a) минимизацию потерь начальной концентрации тест-микроорганизмов во время транспортирования, обращения с ним и хранения в течение срока годности;

• b) соответствие устройству для испытания процесса стерилизации.

• 4.4.3 Соответствие требованиям 4.4.2 должно проверяться путем визуального контроля носителя и первичной упаковки, подвергшихся воздействию стерилизации при максимальных значениях и скоростях изменения физико-химических параметров процесса стерилизации.

Примечание — Пределы изменения этих свойств приведены в соответствующих частях ГОСТ Р ИСО 11138.

• 4.4.4 Во время и после процесса стерилизации носитель и первичная упаковка не должны поглощать или выделять никаких веществ в количествах, способных замедлить рост малого числа выживших тест-микроорганизмов в условиях выращивания при попадании этих веществ в среду выращивания.

Порядок выполнения тестов на проверку соответствия этим требованиям приведен в приложении F.

• 4.4.5 По требованию потребителя изготовитель обязан предоставить сведения о предельных размерах носителя.

• 4.5 Инокулированные носители

  • 4.5.1 При изготовлении одной партии носителей должен использоваться только один штамм тест-микроорганизмов.

  • 4.5.2 Инокулированные носители готовят путем нанесения на них суспензии тест-микроорганизмов с последующим высушиванием в контролируемых условиях.

  • 4.5.3 Условия, при которых осуществляется инокуляция, должны быть разработаны, вал иди-рованы и проконтролированы, чтобы гарантировать отсутствие в инокулированном носителе посторонних микроорганизмов, которые могут ухудшить характеристики продукции в соответствии с ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

  • 4.5.4 Каждый носитель должен содержать одно и то же количество клеток тест-микроорганизма.

  • 4.5.5 Условия хранения инокулированных носителей и срок годности определяет изготовитель. Эти условия должны контролироваться в период хранения. Они должны соответствовать требованиям к инокулированным носителям, издоженным в ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

  • 4.5.6 При упаковывании инокулированных носителей с целью превращения их в биологические индикаторы упаковка не должна изменять номинальную популяцию и препятствовать проведению работ с конкретными носителями.

  • 4.5.7 Каждую серию инокулированных носителей должна сопровождать информация, содержащая:

• a) название «инокулированные носители»;

• b) название тест-микроорганизма;

• c) руководство по применению, специальные данные, касающиеся питательной среды и условий, необходимых для роста тест-микроорганизмов после воздействия процесса стерилизации;

• d) название коллекции культур, откуда был взят тест-микроорганизм, и ссылка на номер штамма;

• e) число тест-микроорганизмов на одном инокулированном носителе;

О номер серии или специальный код, по которым может быть восстановлена история производства;

• g) характеристики резистентности инокулированных носителей к воздействию процесса стерилизации, которому они должны подвергаться, включая условия тестирования и методы определения указанных характеристик;

• h) число инокулированных носителей во вторичной упаковке;

• i) рекомендуемые условия хранения;

• j) срок годности инокулированных носителей;

• k) название изготовителя, торговая марка, адрес или другие средства идентификации;

• l) процесс стерилизации, для контроля которого предназначен инокулированный носитель; ш) инструкции по утилизации и уничтожению.

4.6 Биологические индикаторы

• 4.6.1 Биологические индикаторы должны быть изготовлены путем упаковки отдельных инокулированных носителей в первичную упаковку.

• 4.6.2 Первичная упаковка должна быть сконструирована, изготовлена и валидирована так, чтобы находящийся в ней биологический индикатор отвечал требованиям ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

• 4.6.3 Первичная упаковка должна быть сконструирована, изготовлена и валидирована так, чтобы в период хранения и транспортирования в соответствии с инструкциями изготовителя биологический индикатор и инокулированный носитель были защищены от контаминации и потери инокулята из носителя.

• 4.6.4 Условия помещения в первичную упаковку должны быть четко определены, валидиро-ваны и проконтролированы, чтобы инокулированный носитель не содержал микроорганизмы, иные, чем тест-микроорганизмы, и которые могли бы неблагоприятно повлиять на характеристики продукта так, как это определено стандартами ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3 соответственно.

• 4.6.5 Первичная упаковка должна быть валидирована в соответствии с ее назначением и соответствующим международным или национальным стандартом.

• 4.6.6 Каждая первичная упаковка для биологического индикатора должна иметь этикетку, содержащую следующую информацию:

• a) название тест-микроорганизма;

• b) номер серии биологического индикатора;

• c) срок годности биологического индикатора;

• d) указание на процесс стерилизации, которому соответствует биологический индикатор;

• e) название изготовителя, торговую марку, адрес и другие данные.

• 4.6.7 Биологические индикаторы должны быть упакованы во вторичную упаковку для транспортирования и хранения.

• 4.6.8 Вторичная упаковка должна быть снабжена этикеткой, содержащей следующую информацию:

• a) название «биологические индикаторы»;

• b) информацию, указанную в 4.6.6;

• c) название коллекции культур, откуда был взят тест-микроорганизм, и ссылку на номер штамма;

• d) число тест-микроорганизмов, находящихся в каждом биологическом индикаторе, как это определено для серии инокулированных носителей;

• e) количество биологических индикаторов во вторичной упаковке;

0 рекомендуемые условия хранения;

• g) резистентность тест-микроорганизмов в инокулированном носителе, находящемся в первичной упаковке, включая условия тестирования и методы, используемые для определения указанных характеристик;

• h) руководство по применению, особенно данные, касающиеся питательной среды и условий, при которых выращиваются тест-микроорганизмы после воздействия факторов стерилизации;

• i) инструкции по утилизации и уничтожению.

Текст этикетки должен быть на русском языке.

• 4.6.9 Каждая вторичная упаковка должна быть снабжена копией сертификата для каждой серии биологического индикатора, который должен включать следующую информацию:

• a) информацию, указанную в 4.6.8;

• b) характеристики резистентности индикаторов к воздействию процесса стерилизации, для контроля которого предназначены инокулированные носители;

• c) ссылку на настоящий стандарт и другие соответствующие международные стандарты.

• 4.6.10 Каждая вторичная упаковка должна быть снабжена письменными инструкциями по работе с биологическими индикаторами и по определению числа выживших микроорганизмов, а также следующими требованиями:

• a) биологические индикаторы должны храниться при условиях, указанных изготовителем;

• b) биологические индикаторы данной серии не должны использоваться после истечения срока хранения;

• c) после выдержки в проверяемом цикле стерилизации биологические индикаторы должны быть изучены на наличие выживших микроорганизмов в течение времени, указанного изготовителем;

• d) при проверке индикаторов для оценки выживших тест-микроорганизмов должны использоваться методы и условия, предписанные изготовителем. Если применяются альтернативные методы, то они должны быть валидированы.

• 4.7 Автономные биологические индикаторы

• 4.7.1 Автономные биологические индикаторы должны соответствовать всем требованиям настоящего стандарта.

• 4.7.2 Автономные биологические индикаторы должны быть достаточно прочными, чтобы переносить транспортирование во вторичной упаковке, а также обращение без повреждений в месте использования.

Конструкция автономного биологического индикатора должна обеспечивать:

• a) минимизацию потерь исходного инокулята тест-микроорганизма во время транспортирования и обращения с ним;

• b) возможность использования его совместно с устройством для испытания процесса стерилизации.

• 4.7.3 Во время и после завершения процесса стерилизации материалы, из которых изготовлен автономный биологический индикатор, не должны удерживать или выделить какие-либо вещества в таком количестве, которое может ингибировать рост малого количества выживших тест-микроорганизмов при заданных условиях культивирования (см. приложение F).

5 Определение резистентности

• 5.1 Требования к определению резистентности

• 5.1.1 Резистентность (устойчивость) каждой серии биологических индикаторов должна быть показана экспериментально, чтобы подтвердить соответствие требованиям ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

• 5.1.2 Контроль резистентности (5.4 и 5.5) должен включать определение числа выживших тест-микроорганизмов и определение характеристик резистентности комбинацией двух или более следующих методов:

• a) определение величины D путем построения кривой выживаемости;

• b) определение величины D методом анализа частичного прорастания;

• c) расчет окна выживания—гибели с использованием рассчитанной величины D и проверка характеристик выживания—гибели.

• 5.1.3 Величины, определенные такими методами, должны находиться в пределах, указанных в ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3 соответственно. По крайней мере две из этих величин должны быть приведены на этикетке вторичной упаковки и в сертификате, сопровождающем каждую серию инокулированных носителей (4.5.7).

Примечание — Соответствующие разделы ГОСТ Р ИСО 11138 могут потребовать дополнительных определений (например, величины z для стерилизации биологических индикаторов влажным теплом, как предусмотрено ГОСТ Р ИСО 11138-3).

• 5.2 Расчет окна выживания—гибели

Окно выживания—гибели может быть рассчитано с использованием одной из величин Д определенной согласно приложениям В и D по следующим формулам:

Время (доза) выживания i D (IgW — 2),

где W — число тест-микроорганизмов на одном носителе, указанное в маркировке.

Время (доза) гибели < D (Igjv + 4).

• 5.3 Определение числа выживших тест-микроорганизмов

Порядок определения числа выживших тест-микроорганизмов приведен в приложении А.

• 5.4 Определение величины D

• 5.4.1 Данные для расчета величины D для биологических индикаторов должны быть получены в соответствии с приложением В (т.е. построением кривой выживания с использованием прямого подсчета тест-микроорганизмов) и/или приложением С (анализ частичного прорастания или метод наиболее вероятного числа).

• 5.4.2 Величина D рассчитывается в соответствии с приложением В и/или D.

• 5.4.3 Могут быть использованы другие методы, но при этом должна быть продемонстрирована их эквивалентность эталонному методу.

• 5.5 Определение характеристик выживания—гибели

Характеристики выживания—гибели определяются и проверяются в соответствии с приложением Е.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(обязательное)

Определение числа живых тест-микроорганизмов

А. 1 Инокулированные носители должны быть исследованы на наличие выживших тест-микроорганизмов в соответствии с А2 — А4 или альтернативным методом. При использовании альтернативного метода должно быть известно соотношение рекомендуемого и альтернативного методов.

А.2 Следует использовать не менее четырех проб из каждой партии, серии или экспозиции. Каждая проба должна быть помешена в вымывающую питательную среду соответствующего объема. Тест-микроорганизмы вымываются от инокулированных носителей с помощью принятой методики (например, встряхиванием со стеклянными бусами, перемешиванием в гомогенизаторе, ультразвуковом или другим соответствующим методом).

АЗ Суспензия должна разбавляться в соответствующей стерильной разбавляющей жидкости так, чтобы в дозах, предназначенных для посева в чашках, находилось от 30 до 300 колониеобразующих единиц (КОЕ). Указанные дозы стерильной жидкости должны быть либо перемешаны с расплавленным питательным агаром, либо посеяны в чашки с твердой питательной средой. Изготовители биологических индикаторов должны указать или обеспечить поставку соответствующей среды и/или привести полные данные для приготовления такой среды.

А.4 Помещенные в чашки пробы должны инкубироваться при температуре и в течение времени, установленных изготовителем.

Примечания

• 1 Обычно температура и время инкубации составляют от 55 до 60 *С не менее 48 ч для термофильных организмов и от 30 до 37 *С не менее 48 ч для мезофильных организмов.

• 2 Высыхание питательных сред при повышенных температурах инкубации может неблагоприятно влиять на рост.

А.5 После соответствующего периода инкубации должно быть подсчитано количество колонисобразую-ших единиц в чашках и по ним вычислено среднее количество выживших тест-микроорганизмов.

ПРИЛОЖЕНИЕ В (обязательное)

Метод кривой выживания

Примечание — Идеальная кривая выживания является линейной во всем диапазоне инактивации. На практике имеют место отклонения от этого идеала, однако линейность должна сохраняться в приемлемых пределах. Построение кривой выживания методом прямого подсчета позволяет представить резистентность популяции численностью более 5 х 10¹, в то время как метод MPN (приложение С) позволяет представить резистентность популяции численностью менее 5 х 10°. Хорошая корреляция между величинами D, полученными этими двумя методами, позволяет утверждать, что серьезных отклонений от линейности кривой выживания не наблюдается.

В.1 Исследуемые пробы подлежат обработке при ступенчатом возрастании экспозиции (выдержки) в определенных условиях. Должен быть установлен диапазон изменения экспозиции. Каждая экспозиция или доза должны отличаться от предыдущей на постоянную величину.

Примечание — Требования к характеристикам аппаратуры приведены в ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

В.2 Должны быть использованы не менее пяти экспозиций, которые должны включать:

• a) одну экспозицию, в которой проба не подвергается воздействию стерилизующего агента (стерилизующий агент может отсутствовать или может быть заменен на газ, не вызывающий летального действия);

• b) снижение популяции до 0,01 % исходного инокулята, по крайней мере, при одной экспозиции.

В.З В каждой экспозиции должно быть использовано не менее четырех инокулированных носителей в каждом определении. При каждой экспозиции должно быть то же самое количество повторностей.

В.4 Отобранные пробы должны быть обработаны в течение 2 ч после завершения каждой экспозиции, чтобы удалить тест-микроорганизмы из носителя. Определение числа выживших тест-микроорганизмов должно быть проведено в специальных условиях культивирования по методам, установленным изготовителем.

В.5 Пользуясь полученными данными, строится кривая зависимости логарифма выжившей популяции от времени в минутах или уровня дозы в линейном виде кривая регрессии, пользуясь методом наименьших квадратов. Точки с данными выживаемости менее 0,5 логарифма начальной популяции не должны включаться в регрессионный анализ. Пс отрицательному наклону линии регрессии рассчитывается величина D в минутах или в единицах поглощенной дозы.

В.6 Коэффициент регрессии линейности кривой выживания должен быть не менее 0,8.

ПРИЛОЖЕНИЕ С (обязательное)

Фракционный негативный анализ (метод MPN для последовательного определения величины D с использованием ограниченного метода Спирмана-Карбера)

Примечание — Фракционные негативные данные применяются для определения влияния процесса стерилизации на характеристики резистентности тест-микроорганизмов с помощью метода наиболее вероятных величин — MPN (Мим Probable Number).

С.1 Контролируемые пробы должны быть подвергнуты кратным экспозициям в определенных условиях воздействия всех переменных факторов процесса стерилизации, исключая продолжительность или уровень дозы воздействия, которые остаются постоянными. В каждой экспозиции должно быть не менее 20 повторностей. Каждый период экспозиции или уровень дозы должен отличаться от предыдущего на постоянный интервал. В каждой экспозиции должно использоваться одно и то же количество повторностей.

Примечание — Требования к работе испытательного оборудования приведены в ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

С.2 После 2 ч экспозиции каждый инокулированный носитель в асептических условиях помешается в пробирку, содержащую адекватное количество соответствующей стерильной питательной среды. Объем среды должен быть одинаков для каждой повторности. Если питательная среда включена изготовителем в состав биологического индикатора, то изготовитель должен приложить инструкции по культивированию, а также выдать требования к питательной среде или указать на возможность ее приобретения и/или привести исчерпывающие данные для ее приготовления.

С.З Инокулированные носители инкубируются при температуре, рекомендованной изготовителем. Культуры исследуются на рост тест-микроорганизмов по истечении времени инкубации, рекомендуемого изготовителем. Рост тест-микроорганизма может быть установлен по мутности питательного бульона, поверхностному росту’ на бульоне или осаждению на дне пробирки в зависимости от характеристик тест-микроорганизма.

С.4 Результаты следует записывать в виде отношения инокулированных носителей с выжившими тест-микроорганизмами к общему числу инокулированных носителей, подвергнутых воздействию каждой сублетальной экспозиции.

ПРИЛОЖЕНИЕ D (обязательное)

Расчет величины D с использованием ограниченного метода Спирмана-Карбера

• D.1 Расчет величины D

Примечание — Ограниченный метод Спирмана-Карбера (Spearman-Karber) требует, чтобы последовательные экспозиции отличались друг от друга на постоянный интервал d и в каждой экспозиции использовалось одно и то же число реплик (биологических индикаторов) п.

• D. 1.1 Чтобы охватить фракционно-негативную область, нужно выбрать интервал экспозиции или уровня доз (U_it U₂ ,…, U&. Начальная экспозиция Ц выбирается так, чтобы стерилизующий эффект был равен нулю

или г => 0. Последняя экспозиция выбирается такой, чтобы был обеспечен полный стерилизующий эффект или т — п. Тест считается действительным, если в экспозиции, предшествующей Ц, отсутствуют отрицательные (сггрильныс) единицы (г-О)ив экспозиции, следующей за U^, присутствуют только отрицательные единицы (г = л). При этом в двух промежуточных интервалах между V\ и (/* (где 0 < г < л) должны быть две значимые пробы. Затем рассчитывается средняя экспозиция до достижения стерильности или ограниченного показателя Спирмана-Карбера по формуле

где — средняя экспозиция до достижения стерильности (оценка ограниченного показателя Спирмана-Карбера);

~ первая экспозиция, в которой наблюдаются все стерильные реплики, r_k = л;

d — интервал времени или дозы между экспозициями;

л — число реплик (биологических индикаторов) в каждой экспозиции;

• — число стерильных реплик в каждой экспозиции;

U] — самая длительная экспозиция, в которой не наблюдаются отрицательные биологические индикаторы, г – О;

• — экспозиция, предшествующая U&

I И — сумма стерильных реплик (г) во всех экспозициях между Ц и U_k__t

• D. 1.2 Величина D рассчитывается по формуле

lgN₀ + 0,2507’

где U& — среднее значение экспозиции до достижения стерильности, полученное из предыдущей формулы; Nq — среднее число живых спор в расчете на один биологический индикатор, определенное по всему’ количеству живых спор.

• D.2 Расчет дисперсии стандартного отклонения и доверительного интервала с помощью метода Спирмана-Карбера

Примечание — Расчет по методу Спирмана-Карбера позволяет установить вариацию U& и, в свою очередь, рассчитать стандартное отклонение и доверительный интервал.

D.2.! Дисперсия £/^, т.е. (С4к) рассчитывается по формуле

где d — интервал времени или дозы между экспозициями; п — число проб (реплик) в каждой экспозиции;

— число стерильных реплик в каждой экспозиции;

1

X q (п – г-) — сумма величин, полученная умножением r_t на (л—г,) для каждой экспозиции и между Ц и !• 1

D.2.2 Стандартное отклонение Uj&SDuj рассчитывается по формуле

D.2.3 Пользуясь верхним и нижним доверительными пределами U& (доверительные пределы для равны U^± 2SDy* ;р — 0,95), рассчитывается нижний и верхний доверительные пределы для D:

нижний доверительный предел

V_A-2SD_v*

Мо + 0,2507 ^:

верхний доверительный предел U_A

” lg/V₀ + 0,2507

ПРИЛОЖЕНИЕ Е (обязательное)

Характеристики выживания—гибели

Примечание — Контроль характеристик выживания—гибели с помощью большого числа биологических проб является дополнительным средством, гарантирующим постоянство характеристик всех единиц в каждой данной серии.

Е.1 Значения величины D, вычисленные либо из кривой выживания, либо путем использования метода фракционного негативного анализа (приложения В и D), должны использоваться для расчета времени (дозы) выживания и времени (дозы) гибели.

Е.2 Для получения надежных величин времени (дозы) выживания и времени (дозы) гибели следует использовать не менее 50 проб.

Е.З Для характеристики времени (дозы) выживания и времени (дозы) гибели необходимо не менее 50 проб. Характеристика выживания — это фиксированная экспозиция времени (дозы), которой соответствует определенное количество выживших организмов в каждой единице пробы. Характеристика времени (дозы) гибели — это фиксированная экспозиция времени (дозы), которой соответствует полная гибель всех организмов в каждой единице пробы.

Е.4 Характеристики выживания — гибели должны определяться в резистомере биологических индикаторов. Периоды времени/дозы выживания — гибели определяются следующим образом:

Время (доза) выживания i D (lg Nq — 2),

где Nq — исходное количество организмов.

Время (доза) гибели £ lg (No + 4).

Примечание — Число проб, взятых для каждой экспозиции, будет зависеть как от производительности, так и от рабочих характеристик используемого резистомера биологических индикаторов. Иногда следует выполнить несколько предварительных экспозиций для времени/доз как для выживания, так и гибели, чтобы определить необходимое общее количество проб.

ПРИЛОЖЕНИЕ F (справочное)

Определение ингибирования роста материалами носителей и первичных упаковок

во время стерилизации

• F.1 Материалы

• F.1.1 Суспензия тест-микроорганизмов одного штамма, приготовленная тем же способом, что и тест-микроорганизмы, предназначенные для инокуляции носителей. Суспензия должна состоять из микроорганизмов известной популяции, определенная по числу живых микроорганизмов, позволяющая выделить их в количестве от 10 до 100 единиц.

• F. 1.2 Резистомер должен соответствовать требованиям, определенным в последующих частях настоящего стандарта.

• F.1.3 Питательная среда — как определено условиями культивирования.

F.1.4 Установка для инкубирования с контролем температуры — как определено условиями инкубирования.

F.2 Метод определения

F.2.1 Представительное количество из 12 неинокулированных носителей разделить на шесть групп по два носителя. Приготовить девять контейнеров с питательной средой (средой роста).

F.2.2 Упаковать каждый из двух носителей каждой из этих трех групп в материал, используемый для изготовления биологических индикаторов, и подвергнуть их стерилизации.

F.2.3 Установить рабочие условия в резистомере по ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

F.2.4 После завершения процесса как можно быстрее, но не позднее чем через 120 мин, развернуть носители и в асептических условиях перенести в питательную среду, не подвергая их при этом немедленной обработке. Записать время, необходимое для полной передачи.

F.2.5 Поместить одну группу по два носителя в каждый из трех контейнеров с питательной средой, предварительно инкубированной при соответствующей температуре. Инкубировать питательную среду при установленной температуре в течение 2 ч, чтобы позволить ингибирующим веществам десорбироваться из носителей. Извлечь питательную среду из инкубатора и инокулировать ее таким количеством суспензии тсст-микроорганизмов, которое содержит от 10 до 100 тест-микроорганизмов. Вернуть инокулированную питательную среду в инкубатор и инкубировать ее в течение времени, установленного изготовителем дтя регенерации биологических индикаторов при нормальных условиях их использования.

F.2.6 Отрицательный контроль: поместить одну группу по два носителя, не подвергнутых стерилизации, в каждый из трех контейнеров с питательной средой, инкубированной в течение 2 ч, инокулировать их тест-микроорганизмами в количестве от 10 до 100 и инкубировать в течение периода времени, установленного изготовителем, и в тех же условиях, упомянутых выше.

F.2.7 Положительный контроль: инкубировать три контейнера с питательной средой в течение 2 ч, инокулировать их тест-микроорганизмами в количестве от 10 до 100 единиц и инкубировать так же, как указано выше.

F.2.8 После окончания установленного периода регенерации извлечь все девять контейнеров из инкубатора и исследовать их на наличие живых организмов в соответствии с инструкциями изготовителя.

F.2.9 Записать результаты наличия и отсутствия роста тест-микроорганизмов.

F.3 Интерпретация результатов

F.3.1 Если отсутствие роста отмечается в одном или более позитивных контрольных образцах, испытание считается недействительным.

Примечание — Отсутствие роста в позитивном контроле может объясняться ошибкой контроля популяции тест-микроорганизмов или несоответствующими условиями регенерации (питательная среда, температура и Т.Д.).

F.3.2 Если отсутствие роста наблюдается в одном или более отрицательных контрольных образцов, носитель не может считаться пригодным для изготовления инокулированных носителей или биологических индикаторов.

Примечание — Отсутствие роста в отрицательных контрольных образцах при наличии роста в положительных контрольных образцах может означать, что материал, из которого изготовлен носитель, сам является ингибитором роста тест-микроорганизмов.

F.3.3 Если отсутствие роста наблюдается в одном или более испытаний носителей, подвергнутых стерилизации, носитель не может считаться пригодным для изготовления инокулированных носителей или биологических индикаторов.

Примечание — Отсутствие роста может объясняться высоким уровнем адсорбции/абсорбции стерилизующего агента или деградацией материала носителя во время процесса стерилизации

F.4 Определение ингибирования роста, вызванного материалами упаковки

Образцы материала первичной упаковки могут быть испытаны тем же способом, что и носитель (F.l — F.3). Образец части материала первичной упаковки должен быть достаточным для погружения в питательную среду объемом, равным удвоенному объему питательной среды, необходимой для нормального контакта с инокулированным носителем, или для автономных биологических индикаторов в объеме, эквивалентном для нормального контакта с питательной средой.

УДК 637.132.4:715.478:658.513:006.354 ОКС 11.080 Р26 ОКП 94 5120

Ключевые слова: медицинская продукция, стерилизация, биологические индикаторы, спецификации, требования к изготовлению, маркировка, упаковка

Редактор PC Федорова Технический редактор В.И. Прусакова Корректор М.С. Першина Компьютерная верстка А.Н. Золотаревой

Изд. лии. № 02354 от 14.07.2000. Сдано в набор 26 10.2000. Подписано в печать 02-112000. Усллечл. 1,86. Уч.-изал. 1,40. Тираж 204 жз. С 6130. Зак. 975.

ИПК Издательство стандартов, 107076, Москва, Колодезный пер., 14. Набрано в Издательстве на ПЭВМ

Филиал ИПК Издательство стандартов — тип. “Московский печатник**, 103062, Москва, Лялин пер., 6. Плр № 080102